樽满秋华 发表于 2015-5-24 12:52:28

病毒多角体 DNA 的提取

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将约109的病毒多角体悬于400μl双蒸水中,加入200μl 3×DAS溶液,37℃碱解15min。在3000rpm离心5min去除未裂解的多角体,将包含有病毒粒子的上清转移至一新离心管中。加蛋白酶K至终浓度为200μg/mL,置于50℃水浴中酶解2.5h,然后加SDS至终浓度为1%,继续作用0.5h。等体积Tris饱合的苯酚抽提一次,等体积的苯酚/氯仿(1:1)抽提一次,加入两倍体积的95%乙醇沉淀,混匀后在-70℃沉淀5min或在-20℃沉淀30min。12,000rpm离心15min,用70%乙醇洗涤沉淀一次,吹干。 用60μl双蒸水溶解,4℃保存备用。
3×DAS溶液:0.3mol/L Na2 CO3, 0.5 mol/L NaCl, 0.03 mol/L EDTA, pH10.5。
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