求大片段RT-PCR老手指教
小弟目前在做感染性克隆,手上有一2.2KB的片段,以病毒RNA为模板P了很多次,都没P出来,电泳结果显示只是在1KB以上到2KB左右有一大团杂带。 RT-PCR条件调整过很多次,但没有用。望各路高手指点一下,叩谢~~~楼主:蓝色水瓶
原帖链接:http://biosky.haotui.com/thread-24672-1-1.html
使用INvitrogen公司的长片段反转录酶,PCR反应条件再进行优化可能能解决。
2#hxq78316
以病毒RNA为模板先逆转录成cDNA,然后再PCR,你怎么能直接以RNA为模板进行PCR呢。
如果P不出来,你可以在1K左右位置处设计中间引物,分两次P,然后再overlap下。
3#ipsvirus
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