序道 发表于 2015-8-12 19:56:05

有谁用pMAl系统做过原核表达

pMAL系统做原核表达,表达蛋白的纯度及量怎么样,有做原核表达更好的系统吗,表达的蛋白需要提纯做多抗?












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楼主:bfvirus

序道 发表于 2015-8-12 19:57:20

1#未知树


我们实验室用的就是这个系统。 总得来说,表达量和纯度还是比较理想的。
但是, 这个要根据蛋白来定。 前前后后,实验室用它表达了10中以上的蛋白,大部分是很纯的,表达量也非常大。但是,个别蛋白,表达出来之后挂不上柱子,当然,这个蛋白是我们突变之后的,也许这个突变位点影响了蛋白的折叠,导致了MBP无法挂柱。

有一点儿不方便的是: 该蛋白的融合标签太大,在40kDa左右,制备多抗之前,需要用Factor Xa切除。 这样,要求你所纯化的蛋白量非常大,并且,有些蛋白不是很稳定,在切除标签之后,发生了讲解。

如果你不切除标签蛋白,制备的抗体,基本是很难用于更精细的实验的。 比如IF,会有比较多的背景。

序道 发表于 2015-8-12 19:58:09


2#未知树


用不切除标签的融合蛋白免疫兔子制备多抗,用于western blot, 特异性还是比较高的。
祝你好运~~
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