【转移帖】 HBV在细胞系中的表达
原帖由emma0802发表于 2010-6-20 20:39:身为小白的我有很多困惑,可能是一些很基础的知识,所以人家文献也好,教材也好都懒得说了,只好在这里请教各位大侠。
我们知道,在HepRG出现前的细胞系都不能天然感染HBV,要想检测HBV的特性,只有将其基因转入细胞系内,一般有两种方法,一是线性直接转入,另外一种是作成1.1,1.2,1.3倍体结合到表达质粒上,然后再转入细胞系中。但是我一直不明白为什么非要作成加长的DNA,加长的是哪一部分。我们师姐作了一个全长的,也能正常表达抗原,并能检测到dna复制,但是我们无法解释这个事情。 bigen发表于 2010-6-21 12:42 :
因为HBV的基因组很紧凑,几个蛋白ORF的区域有重复
一倍体病毒全长应该是检测不到dna复制的,除非那是质粒的复制,不是整合到细胞基因组上面的
xray19发表于 2010-6-23 18:58:
一倍体全长在两端加有Sap1酶切位点,转入细胞后可自身环化成闭环病毒DNA,不知道楼主师姐是不是采用的这个策略。
emma0802发表于 2010-6-24 13:40 :
不是的用了pcdna3.1载体的 xray19 发表于 2010-6-24 18:51
有辅助载体吗?仅仅是单倍体HBV构建人3.1载体吗?这怎么会有病毒复制呢?能否详细问下你师姐,给大家解释下
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