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标题: ELISA实验中的一点小知识 [打印本页]

作者: wlxn2007 时间: 2016-1-9 22:55
标题: ELISA实验中的一点小知识
ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理？
1、ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用；
2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附（包被）的蛋白，起到“保护剂”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理；那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。

封闭剂还可用5%的脱脂乳（市售即可），0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。

封闭剂的原理就是与酶联板上未结合抗原或抗体的微孔中用封闭剂封闭上，结合抗体或抗原的时候就不会产生非特异结合了，不会影响实验的准确度。

tween的作用：虽然不能单独封闭，但和BSA在封闭时会起到清洗非特异性结合或结合不牢固的蛋白的作用，假如抗体包被在板上会出现YY-<YY的情况，在用tween后会出现YY YY，原先横的-<抗体会被洗去，tween会使今后的elisa特异性结合增强。

作者: rentianyixu 时间: 2016-1-9 22:55
学习了

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