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标题: 关于疫苗宿主细胞蛋白残留的讨论 [打印本页]

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:13
标题: 关于疫苗宿主细胞蛋白残留的讨论

原帖：

http://biosky.haotui.com/thread-5893-1-1.html（）

宿主残留蛋白（Host Cell Protein, 以下简称为HCP），是指在生物制品中残留的宿主蛋白。这类蛋白成分复杂，种类繁多，且由于生产过程及纯化工艺的不同而发生变化。HCP在生物制品中的残留量不仅是对制品批与批间的一致性，而且是衡量生物制品质量的一个重要指标。

目前药典上对于大肠杆菌，酵母表达蛋白的检测方法是双抗夹心ELISA的方法。此类方法中，均有商品化的标准品蛋白及抗体；对于尚没有标准品的表达细胞株，厂家需要建立这类细胞的内部参考品。
内部参考品的建立分为两种，一种是对全宿主细胞蛋白而制备，称之为一般HCP（generic HCP)，即细胞裂解物; 另外一种是特殊工艺HCP（Specific-product HCP)，是由你的空表达载体与宿主细胞一起，在完全模拟生产的条件下得到的蛋白。
对于宿主蛋白检测的一个重要方面就是Anti-HCP的制备，由于细胞蛋白种类复杂，数量众多，为了要保证尽可能多的蛋白能被取得的抗体识别，所以免疫的方法也与常规的蛋白免疫程序也不大相同，也存在着许多问题。
附件里面是一篇关于HCP的文章。
欢迎大家加入到这个话题的讨论。

[ 本帖最后由 gpj402 于 2008-7-24 17:00 编辑 ]

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:15
rojjer：
谢谢楼主分享!
好象常见的表达载体(大肠杆菌，酵母,vero细胞,CHO细胞等)都有试剂盒供应!
希望出事具体工艺方面的朋友参与讨论!

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:16
gpj402:
如版主据说，常见的几种表达细胞都有试剂盒，而且也有国际标准品。但对于目前比较新的表达宿主细胞，如昆虫杆状细胞，杂交瘤细胞，以及植物表达系统的细胞，在进行制品申报的过程中，必须具备宿主细胞蛋白残留方面的资料。和前面所说的一样，如何才能定义细胞全蛋白的制备及全细胞蛋白抗体的制备是核心的问题，如何去做，怎样去做？
真诚希望更多的人加入到这场讨论当中。

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:16

luoronghua

(UID: 712)

检测都用试剂盒。
最重要的是怎么控制宿主蛋白！
不过这是工艺中的关键啊，呵呵一般人估计不会来交流

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:20
回复 4# luoronghua 的帖子

如果都有试剂盒，那就没有什么讨论的意义了，这个帖子现在就可以关门。现在是讨论如何做试剂盒前面的工作，如何准备细胞蛋白，如何制备更有效的检测抗体。
宿主蛋白的控制主要还是在纯化的一步，说大了去也取决于疫苗产品的整个技术路线。这一点非常重要，但是很可惜不是我们主要的讨论范围，这里关注的重点在如何对宿主蛋白进行检测。
“一般人估计不会过来交流”这句话如果主语和宾语换一下的话听起来让人很高兴，不过这样有点骄傲了哈！
这件事情在一个星期前来写下这个帖子的时候我就想到了，因为国内现在生产的东西也就这几种宿主，而且都有成熟的盒子，我们这里对大肠杆菌的HCP检测也是用Dako的抗体来进行的。
重申一下我们讨论的核心，如我在三楼所说的，是宿主细胞蛋白的制备及其抗体的制备方法，欢迎如Luoronghua一样拉风的兄弟姐妹加入讨论。

正好最近也找到一篇关于HCP检测的REVIEW。
分享一下。

[ 本帖最后由 gpj402 于 2008-7-30 10:29 编辑 ]

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:21
zrlp：

谢谢病毒学院小学生提供的参考文献，我想请问有谁知道细胞蛋白的免疫程序，免疫剂量和应注意的关键问题？
最好是针对山羊的，谢谢！

作者: rojjer 时间: 2015-4-1 23:22
dudupan：

谢谢楼主所提供的材料，楼主因该是做QC的吧，我最近也碰到了宿主残余蛋白检测的问题，我们所用的虽然也是大肠杆菌，但却是一型比较少见的菌株，中检所卖的标准品中并没有这一菌株。那我们是不是也要自行制备宿主蛋白及抗血清？

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