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标题: 实验中遇到了一些问题，请各位前辈指教。（关于PEG，adv plaque assay） [打印本页]

作者: mullischan 时间: 2016-3-28 15:55
标题: 实验中遇到了一些问题，请各位前辈指教。（关于PEG，adv plaque assay）
Adenovirus滴度的检测：我用的A549细胞，一般接12孔板细胞密度0.7*10^5，overlay用的是1.8%的Agar，血清的终浓度是2%，以前用的1.5%的Agar但是plaque的形状会不圆，很难看，现在用了1.8%不知道是细胞密度没有控制好还是怎样，细胞长到第6-7天时有很多细胞因为没有营养都死掉了，夹在单层细胞和Agar中间，很难看，甚至影响看plaque。但plaque会比较圆。
不知道有没有前辈和我做一样的病毒，给我一些建议或者告诉我一些以前做实验的经验吧。谢谢各位了。

PEG提纯Adv病毒：用PEG沉淀法提纯的Adv，做Plaque assay时，因为有残留的PEG，一加到细胞中，细胞就都死掉飘起来了，稀释是可以解决问题，可是因为是做环境的，我们会模拟病毒滴度很少的情况，所以稀释太多会无法达到检测效果。不知道如何可以去除PEG但是又不会让Adv减少？

如果我有说的不对的地方和错误的理解，请各位指出。
谢谢各位！

作者: ipsvirus 时间: 2016-3-28 18:50
我没做过腺病毒，但我帮你去别的实验室问了一下。
他们用的是293A细胞做空斑实验，血清浓度近9%，agar0.4%。

病毒是用CsCl密度梯度离心纯化的。

希望对你有用。

作者: mullischan 时间: 2016-3-29 07:54
非常感谢楼上帮助，多谢了

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