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标题: 重叠 PCR 目的条带模糊,求原因 [打印本页]
作者: randomqd 时间: 2016-7-6 19:52
标题: 重叠 PCR 目的条带模糊,求原因
如下图,红色指向的为我所需要的条带,前4条还算可以,但是后面的6条结果比较差,个人觉得是后面的6条退火温度较低,体系是50ul的 然后退火温度为50度。片段大小4000左右,酶为takara的HS高保真酶!求各位大侠帮小弟找找原因
作者: 序道 时间: 2016-7-7 13:12
我觉得你引物退火温度问题,后面几个你可以换换退火温度,还有我们一般扩长片段和扩短片段的反应稍微有些调整,比如可以添加其他试剂如二甲基亚砜、buffer等等
作者: ipsvirus 时间: 2016-7-7 14:28
你做overlap PCR的详细体系是什么?两个片段加了多少,引物加了多少?PCR循环条件什么?
基于你给出的结果,给我一个简单暴力的解决方法。虽然目的条带很弱,但还是回收,再以回收产物为模板,再次PCR即可。
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