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标题: [转移贴]关于构建BAC载体时加HIS标签 [打印本页]

作者: virology 时间: 2015-7-7 08:32
标题: [转移贴]关于构建BAC载体时加HIS标签
原贴由rodickholmes发表于 2010-7-9 13:54
http://biosky.haotui.com/thread-15589-1-7.html

我用的是PFASTBAC1载体，自己加入HIS标签，我想请问大家以下两种构建方法哪种为正确：

1. 酶切位点+atg+HIS+目的基因信号肽+目的基因成熟肽+酶切位点
2.酶切位点+atg+HIS+atg+目的基因信号肽+目的基因成熟肽+酶切位点

以上哪种可以确保最后表达产物HIS标签不随信号肽的剪切而失去

以下为战友回复：

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丢丢发表于 2010-7-9 17:49 ：我只知道可以把his加在目的基因后面，在目的基因和his中间加上一个蛋白水解位点，这样就可以用his纯化蛋白，再用蛋白水解酶把his切下来~~~~不知道这样对不对~~~~

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一只蜗牛发表于 2010-7-9 19:35 ：你的两种都会被剪掉

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stare024发表于 2010-7-9 19:39 ：蛋白表达后切除信号肽，我觉得rodickholmes的两种方法，有可能成熟蛋白都没有HIS，因为从信号肽切除了，HIS标签随着信号肽一同切除呢？
我认为，是否可以把信号肽加在HIS的前面？或者如2L说说，加在成熟蛋白的后面？

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rodickholmes 发表于 2010-7-9 21:36 ：HIS加到C端，那么下游引物上的HIS序列应该方向互补吧？
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lijiang.bj 发表于 2010-7-26 12:29 ：这两种都不对，建议加在C端。
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iamboy 发表于 2010-7-31 11:32 ：你的两种都不对，虽然你有信号肽，但是最终得结果是一种都不能分泌，表达的蛋白很有可能全部在细胞内，合理的设计是：1.加在c端，2，酶切位点+atg+signal +his +目的基因。

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