中国病毒学论坛|我们一直在坚持！

标题: [转移贴]转座子鉴定 [打印本页]

作者: virology 时间: 2015-7-7 14:44
标题: [转移贴]转座子鉴定
原贴由kmghf 发表于 2010-9-16 21:12
http://biosky.haotui.com/thread-16858-1-7.html

在做重组Bacmid PCR鉴定时,将获得的白斑菌落水煮10mim后PCR扩增目的基因,但得不到扩增,对照应出现一条２５００bp左右的条带，也没有扩增，可以保证pcr体系及引物正确，请帮忙分析还有什么原因，提质粒鉴定会好些吗？

以下为会员回复：
————————————————————
wangyongmei 发表于 2010-9-16 22:51 ：对照都没出现这个体系没问题就很难说咯~~体系没问题的话首先应该检验下对照有没问题，要是对照没问题的话那就应该是体系了只有对照没问题才能说明体系没问题。

stare024 发表于 2010-9-17 19:41 ：提bacmid会好很多，直接煮菌液快速鉴定也可以用，但结果一般不可靠。
1楼还是提出质粒再PCR吧。
等你用提的质粒PCR结果出来再看看吧。
如果还不出来再说。

nk0401 发表于 2010-9-17 22:00 ：3# stare024

版主你好，我最近再做转染，总不成功，希望得到你的指点。

首先我提取的Bacmid浓度很低，用去内毒素的BAC/PAC试剂盒提取40ml（分了许多管，最后在一个柱子洗脱）才得到0.4微克每微升，请问有什么好的方法使提取的浓度高一些吗？比如推荐一些方法和试剂盒。

还有，如果按这个量，转染1微克可以吗？（意思是需要2-3微升）

谢谢！

kmghf 发表于 2010-9-21 20:53 ：版主说得对,我用手提质粒后能扩增出阴阳性的目的基因,但还是不理解,菌落鉴定怎么就不行,因为原理都是一样,只不过纯度有些不一样而已,另外,手提的质位有很多RNA,是否影响后续的转染?

mengyu615 发表于 2010-9-30 09:31 ：对照都没有出现扩增，是不是对照有问题，要不就是PCR体系设置有问题吧！

欢迎光临中国病毒学论坛|我们一直在坚持！ (http://bbs.virology.com.cn/)