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标题: DH10BAC感受态制备方法 [打印本页]

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作者: cao1976    时间: 2015-7-9 19:44
标题: DH10BAC感受态制备方法
DH10Bac中，含有编码转座酶的Helper质粒等，带有抗性。如果你是使用无抗生素的LB，DH10Bac中的质粒即使丢失仍可以生长，将影响转座的效率。同时，在转化后，无法抗在含有Kan和Tet的三抗平板上生长。尤其是，如果你的实验室的DH10Bac是长期连续在无抗生素LB培养的话。

在抗性LB平板上划线，37度培养过夜；
挑取单菌落，接种至3ml抗性LB，280rpm，37度培养至OD600约0.4；
转接1ml至40ml抗性LB中，280rpm，37度培养至OD600约0.4；
冰浴10min；
倒入预冷的50ml离心管中，4度约3000g离心5min；
弃上清，加入预冷的约20ml的0.1M的CaCl2，悬浮后，4度约3000g离心5min；
加入约20ml，预冷的约20ml的0.1M的CaCl2，悬浮后，冰上放30min，4度约5000g离心5min；
加入约2ml的预冷的0.1M的CaCl2，悬浮后，加入甘油，分装保存。

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作者: cao1976    时间: 2015-7-9 19:44
一只蜗牛补充：

放-70度，能放半年。（需加甘油）
放-20度，能放1-2个月。（需加甘油）
放4度，但一定是冰水混合物中，能放1-2星期。（不需加甘油）

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作者: cao1976    时间: 2015-7-9 19:44
一只蜗牛补充：

放-70度，能放半年。（需加甘油）
放-20度，能放1-2个月。（需加甘油）
放4度，但一定是冰水混合物中，能放1-2星期。（不需加甘油）

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