中国病毒学论坛|我们一直在坚持！

标题: 求大片段RT-PCR老手指教 [打印本页]

作者: 序道 时间: 2015-7-20 18:58
标题: 求大片段RT-PCR老手指教
小弟目前在做感染性克隆，手上有一2.2KB的片段，以病毒RNA为模板P了很多次，都没P出来，电泳结果显示只是在1KB以上到2KB左右有一大团杂带。 RT-PCR条件调整过很多次，但没有用。望各路高手指点一下，叩谢~~~

楼主：蓝色水瓶
原帖链接：http://biosky.haotui.com/thread-24672-1-1.html

作者: 序道 时间: 2015-7-20 18:58
使用INvitrogen公司的长片段反转录酶，PCR反应条件再进行优化可能能解决。

2#hxq78316

作者: 序道 时间: 2015-7-20 18:59
以病毒RNA为模板先逆转录成cDNA，然后再PCR，你怎么能直接以RNA为模板进行PCR呢。
如果P不出来，你可以在1K左右位置处设计中间引物，分两次P，然后再overlap下。

3#ipsvirus

欢迎光临中国病毒学论坛|我们一直在坚持！ (http://bbs.virology.com.cn/)