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标题: 培养过PK-15细胞的前辈请进!! [打印本页]

作者: 序道    时间: 2015-8-10 20:19
标题: 培养过PK-15细胞的前辈请进!!
各位前辈们:
    我最近准备用PK-15细胞培养病毒,可对于养细胞一片空白。对于细胞培养的条件,环境,以及细胞培养用到哪些试剂器材等等一律感到陌生,希望能得到各位前辈的帮助,不胜感激。如果能提供相关文献的话就最好了。我找了很久,可是没找着,谢谢!!!




















原帖链接:http://biosky.haotui.com/thread-13908-1-2.html
楼主:demonsboy


作者: 序道    时间: 2015-8-10 20:20
这个细胞很好养的,就是一般的 条件就行了,国产血清10%的DMEM营养液,细胞传代需要胰酶消化,一般都是用5%的CO2的培养箱内培养,先试下,操作一次后,下次操作就容易多了,必要再找资料了,你实践一次就知道所有的问题了,第二次就可以操作好了



4#shuxilou888
作者: 序道    时间: 2015-8-10 20:21
先准备培养细胞的一些器材吧~~比如有:5ml和10ml移液管(21cm左右)、直吹管、弯头吹管、10ml离心管、冻存管(1.8-2.0ml)、锡箔纸、铝制饭盒(装管子用)、铝制烤箱、T75、T50、T25等型号细胞瓶、培养皿、电动移液枪(可以用洗耳球替代)、250ml和500ml瓶子、酸缸(清洁液缸,用厚的塑料桶装就)、稀盐酸缸等等。当然还要有CO2培养箱、倒置显微镜等等。具体可以再查一下坛子里的帖子。

PK细胞还是挺好养的,半年前开始养细胞,就是养PK的。我们实验室用的是HYCLONE的DMEM,加2%-5%四季青小牛血清就可以了。状态好的话长得超快。同瓶1:5传代一般都不用换液了,呵呵,不知道是不是长得太快的缘故。因为只是用来练习,也没在意那么多。消化用0.05%胰酶,消化时间看具体情况,我们的细胞要消化2min-2min15s这样,再多30s就漂了。~~

欢迎多来坛子里交流~~


7#kousyouki
作者: 序道    时间: 2015-8-10 20:22
我用的是胎牛血清,10%血清的DMEM作为生长液,5%血清DMEM作为维持液。消化才2分钟啊?看来你当时的细胞状态不是很好,我用0.05%的胰酶消化在8分钟左右,三天换液,四天传代.我已经养了一年半了,细胞状态非常稳定。

10#ccty0033
作者: 序道    时间: 2015-8-10 20:23
PK-15细胞比较容易养。
用具:细胞瓶、瓶塞、吸管、吸头、CO2培养箱、倒置显微镜。
试剂:含10%牛血清的MEM培养液
营养液配方:(10%)牛血清+(90%)MEM+(1%)双抗+1-(2%)7.5%碳酸氢钠
维持液配方:(2%)牛血清+(90%)MEM+(1%)双抗+1-(2%)7.5%碳酸氢钠
配0.25%胰消化酶,备用。
消化细胞时,用量不用太多。大概用量是营养液总量的1%左右。消化时间具体情况而定。我们可以观察细胞形态变化以及消化时间2min-3min。
传代比例按照细胞计数进行。一般1:3进行传代。


13#yuhong
作者: 序道    时间: 2015-8-10 20:23
恩,建议还是不用0.25%的胰酶,我养了很长时间,发现0.25%的胰酶消化的细胞成团率很高,而且当细胞的状态稍有改变,消化的时间就会变化非常大。所以,还是建议使用0.05%的胰酶进行消化,消化的时间在7-9分钟这样,低浓度的胰酶对细胞的损失也比较小。而,现在DMEM的使用已经比较的普遍,配制也相对简单很多,因此,有条件的话建议还是使用的DMEM。再则,建议不在培养液中添加,虽然这样可以减少实验中的污染概率,但个人感觉不利于提高你的培养技术,而且加双抗的培养液有的实验不能用,比如脂质体转染的时候,就不太好。


14#ccty0033




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