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标题: [转移贴]-谁有关于做流感TCID50具体操作步骤 [打印本页]

作者: rojjer 时间: 2015-9-12 15:27
标题: [转移贴]-谁有关于做流感TCID50具体操作步骤
原帖由guojuan1023 发表于2011年
关于TCID50具体操作步骤，以及photo，谢谢

作者: rojjer 时间: 2015-9-12 15:28
suenmomo：
http://immunopath.dxy.cn/bbs/thr ... words=TCID#14324310

作者: rojjer 时间: 2015-9-12 15:29
一下内容均转载自丁香园：
TCID50的计算一般是参考这个网站来进行的,但是这个网站提供的方法讲的不够具体，本文试图对TCID50的计算做进一步的说明，希望对刚入们同行有所帮助，如有不对，还请多多指教。

TCID50 是指组织培养物（细胞）半数致死剂量。它有几个性质我们必须明白：1）它表示的是计量，不是浓度； 2）它是一个单位；3）它的值等于1，实际上问它的值等于多少是一个没有意义的问题，就像问km的值等于多少一样，如果非要说出的的值等于多少，那我们只能说它的值在任何情况下都等于1。理解这三个性质对于理解TCID50非常重要，但是这三个性质经常被误解，所以导致对TCID50的理解出现偏差。

首先我们来看一下这个表示法的意思：

病毒滴度为108.2TCID50/ml
它表示的是每ml病毒溶液里含有108.2个TCID50的病毒，这和氯化钠的浓度为4.5mol/L表示每L溶液中含有4.5个mol的氯化钠是一样的道理。

经常可以听到人说我的病毒的TCID50是10x.x。这个说法是不科学的，应该说我这个溶液里含有10x.x个TCID50的病毒或者说我这个溶液的病毒滴度是10xxTCID50/ml。也可以说病毒的TCID50效价是10-x.x。

理解了TCID50的概念之后，我们再来看看TCID50是如何计算的？

请看例子：
[img][/img]
[img][/img]
图中给出的计算方法是有问题的，请先忽略不看。

从图中我们可以知道半数致死的稀释度肯定是介于10-6到10－7之间，肯定可以表示成10-6.xx。那么这个.xx到到底是多少呢？
这实际上是一个线性插值的问题。求解见下图：
[img][/img]
根据平面解析几何知识可知：
PD/[log(dilution above 50%)-log(dilution below 50%)]=[(%next above 50%)-50%]/[(%next above 50%)-(%next below 50%)]
＊注意：如果你的病毒是以3倍3倍地稀释那么上面这个公式的log就应该改为是以3为底的对数（即log3），其他稀释度与此相类似。
在本例子中
PD/[(-6)-(-7)]=(80%-50%)/(80%-0%)
PD=0.375
log(50％的致死的稀释度)=-6-0.375=-6.375
求解得到50％的致死的稀释度为10-6.375

根据TCID50的定义，就把在这个稀释度的总体溶液中所含有的病毒的量定义为1个TCID50.
在本例中即把病毒稀释到10－6.375梯度后取0.200ml所含有的病毒的量定义为1个TCID50.

接下来我们就可以根据这个定义来求原液的病毒滴度。通常求解每ml含有多少个TCID50的病毒。
我们先要来求解这个问题：已知取0.008ml病毒原液稀释到10－6.375梯度后(即稀释106.375倍后)取0.200ml所含的病毒的量为1个TCID50，那么病毒原液直接取0.008ml有多少个TCID50.
如果把0.008ml稀释106.375倍后，总共可以得到0.008 x 106.375 ml稀释液，取0.200ml这样的稀释液含有1个TCID50.

所以这0.008ml的病毒原液含有
0.008 x 106.375 ml*1TCID50/0.200ml=0.008* 106.375 *5TCID50＝0.004＊ 107.375TCID50

再求解1ml有多少个TCID50就简单了：
设1ml这样的病毒原液就有x个TCID50
x/1ml＝0.004＊ 107.375/0.008ml
x=0.5＊107.375=1.185*107
所以每ml这样的病毒原液有1.185*107个TCID50，即该病毒原液的滴度为1.185*107TCID50/ml

Tag：TCID50计算方法， 100TCID50，病毒滴度

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