PFU:plaque forming unit,空斑形成单位。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。
MOI :multiplicity of infection,感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值,也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值,没有单位,其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中,含义是感染时病毒与细胞数量的比值。
然而,由于病毒的数量单位有不同的表示方式,从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量,因此其MOI的含义与传统的概念相同。
传统意义上的MOI的测定,其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件,遵循Poisson分布规律,可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数(MOI)。其公式为:
P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP(0)。
其中:
P 为被感染细胞的百分率
P(0)为未被感染细胞的百分率
m为MOI值
例如,如果要感染培养皿中99%的培养细胞,则:
P(0) = 1% = 0.01
m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell。
TCID50 Protocol:
1:制备96孔板单层细胞
2:将病毒做系列稀释,横向接种单层细胞板,每稀释度重复3孔
3:每日观察细胞病变,记录高于50和低于50%病变孔的病毒稀释度,
4:计算比距,获得TCID50
计算比距:
(高于50%的病变率-50%)/(高于50%病变率-小于50%病变率)=比距;
比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加,就获得了指数。
比如:比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50在10的负7和8次方之间,那么,指数-8与比距相加,获得的新的指数,就是TCID50的指数,TCID50=10的-7.几次方
TCID50与 PFU换算: PFUs=0.7×TCID50的滴度
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