[转移贴]-调查 MDCK 细胞好养么？

rojjer

原帖由liushuichong 发表于18/1/2012 14:24

说实话，我刚接触培养MDCK细胞，个人觉得一点不好养。

我在日本，用的是0.2%EDTA胰酶，37度消化得20分钟，细胞大多抱团，单个的很少。一天后，仍有少量细胞悬浮死掉。

而且，复苏的用cellbanker 冻存的细胞，结果发现细胞内很多黑点，而且形态很瘪，不够饱满。
问问大家的状况

rojjer

半拉木匠：
消化时间太长了吧？消化之前没用PBS洗吧？  这样消化时间肯定长，笑话效果也不好，吹打的时候细胞又会受伤
复苏前两天那个状态没问题，细胞自己代谢的东西，长几天代谢掉就好了。

tb99：
个人觉得MDCK细胞挺皮实
蛮好养的
我用于消化CK细胞的胰酶是0.5%
消化后吹打几次
3d传一次
镜下立体形态很好

lxj830731：
很好养，也长的很快！

liushuichong：
2# 半拉木匠
我用PBS洗过两次，小细胞瓶加1ml胰酶，我们实验室的细胞就是不好掉下来。通常他们5天一传。
你一般消化多长时间？

rojjer

半拉木匠 ：
6# liushuichong
T25的小瓶子么？ 加1ml有点少，我们一般为了快都加3ml， 少也得2ml，才能保证充分覆盖浸润。1ml就得不断的摇才行。 我们一般3~5分钟就下来了呀，1:2传代3天就1代， 是不是你们的细胞代次特别的高啊？已经衰老了？ 还是培养体系不合适？ 你们加多少血清？ 消化液是买的上品还是自己配的？EDTA是多少浓度的？ 消化完成以后消化液得弃去。

rojjer

119：
还可以，只是不好消化而已！

faywupan：
3# tb99
3天传一次？？？那是一比几穿的？

belinda2099：
我用的gibco 0.25%的胰酶消化十几分钟感觉就OK了

9# faywupan
它长得不是很慢啊，一传三，10%的南美血清，三天就满了  


hhy1770：
MDCK细胞生长的比较快，所以比例可以适当的放大一些，还有就是细胞已长成单层就传代，等长到致密单层厚就不好消化了