求助单抗的问题

ipsvirus

原帖由158584843 2011-3-2 14:45发表于老论坛

我是自己表达的病毒的一段蛋白，做WB显示该蛋白与抗病毒阳性血清反应良好。可是我免疫的小鼠采取的血清与病毒包被的ELISA板不反应。于是我的单抗就做不下去了，各位有遇到这种情况的吗？该怎么解决啊？

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#Rojjer

问题大概了解，想到两种原因：
1，不知道你表达的病毒蛋白是不是病毒表面蛋白？
如果是病毒内部蛋白的话，其可以与抗病毒血清（一般情况下均含有针对病毒结构蛋白的血清）结合，WB也当然能显示出来。但是，当你免疫蛋白后ELISA检测血清抗体时，用全病毒包板的话，抗体却无法与病毒内部蛋白结合。
如是这种问题，建议用裂解病毒包板。

2，可能是所表达的蛋白表位结构与病毒蛋白有所不同，这里面就比较复杂了。
   表达系统是否合适？

仅供参考。

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#drhtd

也有可能是细胞基质打兔子产生多抗,做WB当然有,如果这样的话做ELISA肯定没有结果.
或者是病毒蛋白太少,而且还不太容易与板结合.同时,杂蛋白太多,这样造成病毒蛋白与板结合过少当然也就没有结果 .

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#158584843

谢谢，我的蛋白是囊膜蛋白，也对进行包被的病毒进行了裂解过，可是依然不反应。我的表达质粒是PET系统。

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#Rojjer

原核系统？应该属于以上第二种情况，那难度估计有点大，应该是天然表位发生了改变。
当然在进行靶基因进行一定修饰或改造的基础上进行原核表达也有可能。
建议用酵母系统或细胞表达靶抗原试一试。

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#158584843

谢谢，我的蛋白是将整个蛋白进行截短表达的，我想问构想变化与蛋白长短有关吗，是越短越容易变化吗？

如果说我的蛋白构象发生了变化，那么我的蛋白还会和我的阳性血清反应吗？可是事实是我的蛋白与之反应啊！