【转移帖】找HBV receptor

cao1976

原帖由kinglemon 发表于 2009-6-4 14:25

大家好哈 俺又来了

俺其实是学neuroscience的 最近几个月才对HBV产生了些兴趣 于是读了些文献 发现大家众口一词的认为找不到HBV receptor是这个领域发展比较慢的主要原因：因为不知道到receptor 就没办法建立能够被HBV感染的细胞系（反过来说也成立：因为没有乙肝易感的细胞系 没法很容易的screen for receptor）。俺于是有些兴趣想想怎么做这个问题 在这儿讨论讨论可能的实验设计 行内的牛人们帮忙指点哈 也算抛砖引玉了哈

昨天也说了 过去大家找HBV receptor的方法 一般是screen和HBV surface antigen(主要是preS1 也有用别的)binding的蛋白 用的library有HepG2细胞系 也有用人肝细胞的 （插句话 按说用HepG2表达的蛋白做screen很不靠谱的样子 因为HepG2本身压根就不会被HBV侵染 为什么这样的实验也能发表呢？奇怪） 找到的binding protein不少 按理说下一步应该看看这些protein是不是necessary and sufficient for HBV entry了 比如说RNAi knockdown这个基因 或者把这个蛋白表达在HepG2或者无关的cell line里观察HBV entry情况。可是哪怕是最基本的necessity test我看到的都不多 最多的方法是用这个binding protein的抗体看能不能阻止HBV感染 这应该说是个很间接很没有说服力的检验（即便此蛋白不直接参与HBV entry而是间接的参与某些一般的内吞机制之类 block它的功能多半也会阻止乙肝入侵）

按说还是有比较直接地方法来找HBV receptor的 比如说啊

1> 直接在HepG2 cell line转染人肝细胞cDNA文库 然后用HBV侵染筛选表达HBsAg的细胞（当然还有更方便的方法 不多说了） 从而得到HBV receptor; 2> 直接用质谱比较人原代肝细胞和HepG2 cell line的表面蛋白 找出差异表达的蛋白（原代细胞有cell line没有）看哪些蛋白可能会参与HBV entry（还是上面说的检验方法); 3> 或者还是质谱 但是只比较 新鲜的人原代细胞和培养一段时间的细胞（后者感染性大大下降？） 其他思路类似；等等。。。

当然这些方法也有问题 比如说1>方法 如果HBV receptor需要超过1个蛋白 类似的screen很可能得不到结果 因为类似的转染方法基本只能保证1 copy/cell 不过这种问题也有解决方法就是了。

昨天和这儿的朋友聊了会儿 至少知道某些思路比如1>其实他们或者其他人确实是在做了 那么其他的思路呢？或者还有什么更好的方法呢？而这些方法又有什么样的问题呢？如果至少看不出什么明显的漏洞的话 又是什么因素使得HBV receptor至今都还没有线索呢？

PS 美国做HBV的人相当少 做HIV,HCV,Influenza甚至SARS的都相当多 而且相对来说牛人要多得多 我感觉一个原因是美国HBV的危害要小得多 而且美国有做逆转录和RNA病毒的传统（我个人觉得主要是David Baltimore这个老大的影响） 我不知道这个现状能不能部分的解释为什么HBV的进展要慢得多

cao1976

bigben发表于 2009-6-5 21:28

可能难点在：
1 受体可能不止一个
2 相较与原代肝细胞而言，细胞系里面缺少的支持蛋白或许也不止一个（不一定是受体阶段），或者细胞系存在抑制蛋白
3 原代肝细胞感染率也很低，而且不同的原代感染率不同，原因未知

4 研究HBV的人少，在美国相较于HCV是非主流（可能危害不是很严重），在德国有不少，但是整个来看，研究的人不多。  

cao1976

bigben发表于 2009-6-5 21:28

可能难点在：
1 受体可能不止一个
2 相较与原代肝细胞而言，细胞系里面缺少的支持蛋白或许也不止一个（不一定是受体阶段），或者细胞系存在抑制蛋白
3 原代肝细胞感染率也很低，而且不同的原代感染率不同，原因未知

4 研究HBV的人少，在美国相较于HCV是非主流（可能危害不是很严重），在德国有不少，但是整个来看，研究的人不多。  

cao1976

kinglemon 发表于 2009-6-6 00:12 ：

To bigben


恩 这些都有道理 如果1/2是正确的话 那么其实用肝癌cell line + 人肝cDNA library screen receptor的思路是有问题的 因为这么做理论上只能得到mono-receptor而且还得保证cell line里面没有别的抑制蛋白，尽管这么做应该是最直接的思路。

3为什么会成为难点呢？指望在primary cell里面找受体应该本来就不现实呀 来源太难了

4我也提到了 应该是个原因...

cao1976

kinglemon 发表于 2009-6-6 00:12 ：

To bigben


恩 这些都有道理 如果1/2是正确的话 那么其实用肝癌cell line + 人肝cDNA library screen receptor的思路是有问题的 因为这么做理论上只能得到mono-receptor而且还得保证cell line里面没有别的抑制蛋白，尽管这么做应该是最直接的思路。

3为什么会成为难点呢？指望在primary cell里面找受体应该本来就不现实呀 来源太难了

4我也提到了 应该是个原因...

cao1976

davay 发表于 2009-7-5 14:43 ：

乙肝的受体系统没有必要现在一定要弄清楚,现在HCV可能还没有完全弄清楚.其实问题关键一步,,是要建立一个乙肝能容易感染的cell line,比HepaRG好的cell line.  

cao1976

Bigben发表于 2009-7-10 00:57

To 楼上的davay与原代肝细胞比较，有一个芯片结果说HepG2里面缺失相当多的基因转录
比方说，P450肝药酶家族等等
HepaRG里面P450就和人肝细胞差不多
当然还有其他更多的基因有差别
还有意思的是，HepG2里面有一些肝原代细胞里面没有的基因转录。。。

cao1976

yaoming发表于 2009-7-20 18:29 ：

不知道把胚胎干细胞进行诱导分化成肝细胞后可否感染ＨＢＶ。毕竟原代肝细胞可以感染的。

cao1976

xray19 发表于 2009-7-20 20:51 ：

发现yaoming总是有很好的想法，学习了

不知道是否有人已经这么做了？

cao1976

yaoming发表于 2009-7-22 14:58：

有时候想病毒难道不可以以受体非依赖的方式进入细胞吗，为什么非要一个受体呢？
像有些病毒在细胞间的传播就是不依赖于受体的，但是它也进入了细胞啊！

还有，有没有这种可能，HBV需要一种可溶性受体，这种受体存在于血液中，然后在这种可溶性受体的作用下运送到肝脏，这种可溶性受体然后与细胞膜上的配体结合，这种结合可能会使细胞膜结构发生一些细微的变化，比如一些膜蛋白化学修饰的发生，比如一些蛋白多肽的暴露等，而这些改变也许为病毒的entry所必需呢.其实人体内一些物质的运输就和这差不多呢。

这个假设可以解释如下现象：
由于HepG2细胞不存在这种可溶性受体HBV当然不会感染，而原代肝细胞开始时候有这种可溶性受体的存在，但是浓度比较低，所以只能被低水平的感染。

而HepGR在DMSO的处理下可以发生了类似的改变，所以可被感染。