[转移帖]敬请赐教--Cre-LoxP系统是否可以实现双基因装载

ms003

原始帖由论坛会员xiasang0506发表于 2009-1-11 10:09

各位大侠，本人刚刚做腺病毒载体的构建方面。不知道运用Creator adenoviral vector system 的Cre-LoxP技术是否可以装载双基因，本人实在是困惑，因为携带双基因还必须在两个基因之间添加一个IRES序列。如果用传统的Adeasy 系统感觉效率太低，过程太麻烦。
再请教一个弱弱的问题：不知道我所需要转染的基因有3000多个碱基对，是不是引物设计需要设计多个，而不是只设计上下游就行了！！
此外，基因的片段太长，比如3000多个碱基对，再加上还是双基因，是不是技术上难度比较大，不容易成功哟！！
新手上路，谢谢各位指教！！！！！

ms003

一只蜗牛发表于 2009-1-11 15:16;

可以实现双基因装载。我不知道你的基因分别长3000bp，还是总共长3000bp。但Ads的的容量就是6K都没有问题。
IRES可以用2A peptide代替，在很多方面，后者效果可能更好。
一对引物可以扩增你的目的片段。只是酶的选择上你要稍加注意。