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标题: 2010年版《中国药典》人用狂犬病疫苗效价测定法(NIH法) [打印本页]

作者: hantavirus    时间: 2015-12-20 22:52
标题: 2010年版《中国药典》人用狂犬病疫苗效价测定法(NIH法)
本法系将供试品免疫小鼠后,产生相应的抗体,通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。
试剂 稀释液(PBS) 量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml,混合后加水至5000ml,调pH值至7.2~8.0。
攻击毒株CVS制备
启开毒种,稀释成10-2悬液,接种11~13g小鼠,不少于8只,每只脑内接种0.03ml,连续传2~3代,选择接种4~5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织,研磨后加入含2%马血清或小牛血清制成20%悬液,经每分钟1000转离心10分钟,取上清液经病毒滴定(用10只18~20g小鼠滴定)及无菌检查符合规定后作攻击毒用。
参考疫苗的稀释
参考疫苗用PBS稀释成1∶25、1∶125和1∶625等稀释度。
供试品溶液的制备
供试品用PBS做5倍系列稀。测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12~14g小鼠16只,每只小鼠腹腔注射0.5ml,间隔1周再免疫1次。
小鼠于第一次免疫后14天,用经预先测定的含5~100个LD50的病毒量进行脑内攻击,每只0.03ml。同时将攻击毒稀释成100 、10-1、10-2 和 10-3进行毒力滴定,每个稀释度均不少于8只小鼠。小鼠攻击后逐日观察14天,并记录死亡情况,统计第5天后死亡和呈典型脑症状的小鼠。
计算供试品和参考疫苗ED50值。
计算相对效力
P=T/S×dT/dS×D
式中P为供试品效价,IU/ml;
T为供试品ED50的倒数;
S为参考疫苗ED50的倒数;
dT为供试品的一次人用剂量,ml;
dS为参考疫苗的一次人用剂量,ml;
D为参考疫苗的效价,IU/ml。
【附注】(1)动物免疫时应将疫苗保存在冰浴中。
(2)各组动物均应在同样条件下饲养。
(3)攻击毒原病毒液(100 )注射的小鼠应80%以上死亡。




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