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标题: 问一下,各位收了baculovirus后都用0.22微米的滤膜过滤吗? [打印本页]

作者: cao1976    时间: 2015-7-9 14:23
标题: 问一下,各位收了baculovirus后都用0.22微米的滤膜过滤吗?
原贴joybby 发表于 2011-1-11 23:25
http://biosky.haotui.com/thread-19620-1-5.html

问一下,各位收了baculovirus后都用0.22微米的滤膜过滤吗?最近发现上个月扩增的病毒用来感染居然没有做种的好(先用做种的病毒摸了一下最适MOI,确定了MOI之后,用扩增后的病毒做了大规模表达,但是这次蛋白表达却很少,并且大部分在胞内,几乎没有分泌,而之前用做种的病毒试表达时,蛋白表达很不错),想来想去只可能是以下两个原因:
1. 细胞状态没有上次好?(可能性不大,上次转染是大概是94%存活率,这次是92%,差别并不大)
2. 扩增后的病毒过滤过(做种的只spin过),可能过滤时吸附了很多,病毒的滴度下降很多。(这好好像也不大可能,我测过滴度,扩增后pfu有200million, 并且手册上是推荐过滤的,而virus我查了一下,是60nm*400nm的大小,如果竖着是可以通过滤膜的)
有点confuse, 所以上来请教一下。
作者: cao1976    时间: 2015-7-9 14:23
一般离心取上清即可,不需要过滤




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