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标题: bac to bac 系统供体质粒构建可选用的感受态细胞? [打印本页]

作者: cao1976    时间: 2015-7-10 15:05
标题: bac to bac 系统供体质粒构建可选用的感受态细胞?
原贴由lingbi1982发表于 2011-9-25 22:22
http://biosky.haotui.com/thread-25610-1-4.html

杆状病毒 bac-to-bac 系统,说明书上有这么一段叙述
Once you have cloned your insert into one of the pFastBac™ vectors, you will
transform the ligation reaction into E. coli and select for ampicillin-resistant
transformants. You may use any recA, endA E. coli strain including TOP10,
DH10B™, or DH5a™ for transformation. Do not transform the ligation reaction
into DH10Bac™ cells.

就是说构建供体质粒时用TOP10, DH10B™, or DH5a™感受态细胞做转化是可以的,但是用DH10bac 不行,那是为什么呢?
作者: cao1976    时间: 2015-7-10 15:06
本帖最后由 a86856635 于 2011-9-26 07:08 编辑

recA, endA
recA (Recombination)
功能:recA 基因表达 ATP 依赖型 DNA 重组酶,它在λ-噬菌体与基因组 DNA 的溶原重组
时起作用,同时具有对 DNA 放射性损伤的修复功能。由 recA 基因的变异所产生的基因型
使同源或异源 DNA 的重组不能进行,保持插入 DNA 的稳定性,对 DNA 的转化有利。一个
菌株的基因型如果是 recA,则说明此菌株的表现型是重组缺陷的
endA (Endonuclease)
功能:endA 基因表达非特异性核酸内切酶 I,它能使所有 DNA 双链解开,在 DNA 的复制
和重组中起重要作用。endA 基因的变异将使插入的外源 DNA 更加稳定,提取的质粒纯度
更高。
作者: cao1976    时间: 2015-7-10 15:06
lingbi1982 发表于 2011-9-27 21:57 | :

多谢您的解释。

是不是这么理解recA、endA的基因产物分别为促进DNA 修复、内切酶纠正作用,有利于DNA的连接,DH5a中有这两种物质,而DH10bac中没有,所以不是首选呢?

另外,既然是连接产物那就是基因与载体片段重新连接成环状了,跟完整的质粒一样,只需要进入感受态细胞,与菌体同时复制就可以了,没有连接、纠错的需要了,那为什么必须recA\endA ?




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