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标题: 昆虫病毒包涵体的观察及其他染色法 [打印本页]

作者: virology 时间: 2015-7-13 09:54
标题: 昆虫病毒包涵体的观察及其他染色法
一、目的要求：
昆虫的病原病毒不能采用一般而论的分离培养培养方法，也不能在光学显微镜下观察其病毒粒子的形态，但可以通过染色法后用显微镜观察其病毒的包涵体形态加以识别。
多数昆虫病毒具有包涵体。这就给我们研究、鉴定、利用超显微形态的病毒提供了极大的方便。本实验就是通过染色法识别几种病毒包涵体的形态，学习掌握初步鉴定病毒。

二、实验材料：
1. 滤纸
2.显微镜
3.量筒
4.研钵
5.水浴锅
6.酒精灯
7.显微镜
8.镊子
9.载玻片、盖玻片
10.滴管

三、实验内容：

2． CPV染色：
（1）染液：吉姆萨1克，中性甘油30ml，甲醇100ml。先将染色粉研碎，加少量甲醇充分研磨使溶解，再加入中性甘油30ml，最后加入全部甲醇，混合后置于60度水浴中1小时，冷却后过滤，即为原液。染色时取一份原液加四份甲醇混匀使用。
步骤：涂片火焰干燥，用上述染液1分钟，然后加等量蒸馏水冲洗均匀，继续染色30分钟。水洗、吸干、油镜检查，质形多角体被染为紫色。
用Giemsa染NPV时不着色，因此常用它来进行CPV、NPV的区别染色。
（2）染液：萘酚兰黑0.1克蒸馏水20ml，100%甲醇50ml、冰醋酸30ml。
3． GV染色：
（1）染液：氨基黑0.1克，溶于50ml蒸馏水中，再加入98%甲醇40ml，冰醋酸10ml。
方法：涂片自然干燥，加1滴1%苦味酸（1克苦味酸溶于100ml蒸馏水中），再加氨基黑染色液1滴，轻轻混合，并微加热，待有水蒸气冒出时，停止加热，待凉后洗去染色液，吸干涂片，油镜检查，颗粒体呈兰黑色。
（2）染液：
Ⅰ 0.1g偶胭脂红G、溶于100ml蒸镏水中，煮沸5min，冷却后加入 2ml冰醋酸，用前过滤。
Ⅱ 磷酸0.1g，快绿0.2g，苯胺兰0.1g，蒸镏水100ml，G字橘黄0.5g
4、苏丹Ⅲ染色：用于区别多角体与脂肪球
染色剂为苏丹Ⅲ的饱和水溶液，涂片经染色10-15min，自来水冲洗5-10sec，干之，而脂肪球染成红色，多角体未着色。
5、Zielh石炭酸复红染色
A 液：碱性复红 1g 95%乙醇10ml
B 液：石炭酸5g 蒸镏水95ml
方法：混合二液，涂片用甲醛乙醇固定10min，后用50%乙酸水溶液处理10min，流水冲洗，染色5 min，结果细菌、真菌等为整体着色，而多角体颗粒体边角着色深红色，中间不着色，轮廓清晰。
6、病毒包含体的碱解：
制作研究材料的湿片，在盖片边缘加1滴NaOH，使碱液流向较干处，在400倍显微镜下观察。当碱液流过时，大多数病毒包含体将肿大而溶解，颗粒体病毒的荚膜的肿胀不易看清，而多角体病毒包含体看得十分清楚。

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