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标题: 求助：杆状病毒宿主细胞sf9 培养及大量悬浮培养 [打印本页]

作者: virology 时间: 2015-7-13 11:09
标题: 求助：杆状病毒宿主细胞sf9 培养及大量悬浮培养
原贴由JASON198205发表于 2008-8-3 21:47
http://biosky.haotui.com/thread-6016-1-2.html

向各位同志请教，杆状病毒AcNPV宿主细胞sf9的常规培养方法，如培养基的选择，无血清培养，注意事项，常见问题，如何悬浮培养，如何提高外源蛋白表达效率，如何降低成本等，多谢同志们指导、交流！

作者: virology 时间: 2015-7-13 11:10
gpj402发表于 2008-8-4 15:44 ：杆状病毒的培养之一：
LZ的问题一下也太多了吧。这方面如果牵扯太多的东西了。
有空的时候，我一点一点来回答吧。
今天只来讲宿主细胞的区别，宿主细胞一般常用的有三种SF21，SF9和HF，目前还有几个新的细胞系，比如Invitrogen公司后来改造的细胞系**（名字记不得了），提高了糖基化的序列；一种是由Protein Science公司分离了一个SF9的亚细胞系。常用的三种细胞系各有各自的优点，具体内容参见附件Growth and Maintance of Insect cell lines.
[attach]1004[/attach]

作者: virology 时间: 2015-7-13 11:11
JASON198205发表于 2008-8-4 21:48 ：多谢gpi402了，有空您先介绍一下sf9细胞的贴壁培养和悬浮培养的区别吧，如培养基有何区别，悬浮培养还需要加入肝素吗？氧含量要求？为何sf9细胞既能贴壁培养，又能悬浮培养，悬浮培养是细胞会不会沉淀、结块等，我看了一些文献，看的一知半解，不明白具体Protocol如何，网上好像没有具体的文献讲类似细胞的悬浮培养。谢谢，各位指点！

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gpj402 发表于 2008-8-5 12:28 回复 3# JASON198205 的帖子
贴壁培养和悬浮培养的区别在上面发的那个protocol里面有，非常详尽的对比，这里我不想再翻译。
SF9细胞既能悬浮又能贴壁是由细胞系本身的特点来决定的。补充一点，昆虫细胞的悬浮培养比较简单，只要做好无菌培养即可。

作者: virology 时间: 2015-7-13 11:12
gpj402 发表于 2008-8-5 12:35 ：杆状病毒的培养之二：
一旦决定了你需要的细胞系，下一步就要来做培养基的选择了。
目前对杆状病毒的宿主昆虫细胞的培养基有很多，粗分的话可以按是否添加血清来区分，加血清的如Grace's；不加血清的如SFX，SFM-900，Express Five等等。各种培养基的特性不同，适合的条件也不同，比如不加血清时的培养基更适合表达，添加血清的Grace's更适合转染等，具体的使用要参照厂家的说明书来。

作者: virology 时间: 2015-7-13 11:12
jannie 发表于 2008-8-6 13:01 ：降低成本的话。如果你选择自己配制粉末的培养基，比买成品的肯定要节约。
另外，如果你表达的蛋白不是分泌的细胞外的话，使用有血清培养基也可以，不太影响下一步的纯化。如果表达的蛋白可以分泌在胞外，建议使用无血清培养基。
据说公司里有用三角烧瓶和摇床来做SF9的悬浮的。你可以试试，这样比转瓶和发酵罐要节约成本。

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