AAV滴度的测定

晚风hit

本人新手，想问问版里的高手，AAV滴度测定的比较公认的方法是什么？谢谢了！

一种是检测核酸的PCR方法（缺点是一些没被包装的核酸也会被检测在内），一种是检测外壳蛋白的ELISA方法（缺点是一些没有包被核酸的空壳也会被检测在内）。
这些是11年以前的观点了，目前不知道有没有新的，大家可以探讨一下。

sunxiaomei

晚风hit 发表于 2015-3-27 16:10
我师兄有一个新的改进方法，值得大家学习~
2013年申请，2014年授权专利《一种测定重组腺相关病毒滴度的定量 ...

谢谢楼主的分享

sunxiaomei

晚风hit 发表于 2015-3-27 16:10
我师兄有一个新的改进方法，值得大家学习~
2013年申请，2014年授权专利《一种测定重组腺相关病毒滴度的定量 ...

非常感谢楼主的分享

晚风hit

我师兄有一个新的改进方法，值得大家学习~
2013年申请，2014年授权专利《一种测定重组腺相关病毒滴度的定量PCR方法》
核心思想史通过对除 AAV 结构 ITR 特殊构象的分析，通过对特定ITR的检测来保证检测结果的真实性，减少未包装核酸的影响。


该专利的背景介绍中也有一些权威的传统检测方法，摘录如下：
rAAV2 是基因治疗领域应用最早和最广泛的亚型，也是目前物理、化学和生物性质研究得最清楚的 AAV 亚型。所以标准化指南首先建立在rAAV2 的基础上。该组织对 rAAV2 标准样品统一测定时，要求被测定的 rAAV2 标准样品，必须要达到在不同实验室能进行不同测定所需的量，并具有一定时间内的稳定性。同时，规定了生产和纯化 rAAV2 的标准指南。该组织确定，选择四个方面进行测定实施对 rAAV2 的质量控制 ：（1）使用 A20 酶联免疫吸附法测定 rAAV2 外壳滴度 ；（2）定量聚合酶链反应 qPCR测定 rAAV2 的基因组滴度 ；（3）qPCR 和增强绿色荧光蛋白（EGFP）表达测定感染滴度 ；（4）SDS-PAGE 测定病毒纯化和外壳蛋白。

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