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[转移帖]HCV 展示在细胞表面后WB验证出现多条带怎么解释

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发表于 2015-8-30 11:11:12 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
原帖由jinlove521发表于 2011-3-29 08:53;


请教一下各位大侠,我在sf9表面展示了hcv 的core蛋白,样品先用裂解液裂解,WB验证时出现多条带大小在21kd,49kd附近,49和90kd之间,特异性都有。请问:这是和转膜时间有关吗?这能用Core的低聚体来解释吗?在变性胶电泳时,低聚体是要解开的吗?谢谢!
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 楼主| 发表于 2015-8-30 11:11:47 | 只看该作者
yaoming发表于 2011-3-29 10:57;

jinlove521

和你的转膜时间没有关系,与你的抗体有关,可能你的抗体不是很好。另外,不知道你是怎么封闭的?

变性胶低聚体是要解开的,都是单体的。但是一些化学修饰可能保留。

Core蛋白我没有检测过,不能给你直接的经验。

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 楼主| 发表于 2015-8-30 11:12:18 | 只看该作者
jinlove521发表于 2011-3-29 16:30:

万分感谢版主的赐教。我用的是市购的低脂奶粉加了终浓度是1%的吐温封闭过夜的,抗体用国产的或进口的扎后都有这些条带,也不知道该怎么去解释。

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 楼主| 发表于 2015-8-30 11:13:09 | 只看该作者
yaoming发表于 2011-3-29 22:33;

to 楼上:
jinlove521


只要在目的大小处有,而对照没有就差不多了。另外你抗体浓度不要太高了,太高了杂带会增多。

还有你可以尝试用BSA封闭,BSA封闭效果可能会好一些。

good luck!

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 楼主| 发表于 2015-8-30 11:13:35 | 只看该作者
xiaohongsky发表于 2011-4-9 17:28;

core蛋白在HCV病毒颗粒里是四聚体形式存在,lz可以在样品里加5%的β-巯基乙醇煮沸,以排除低聚体的存在,我做core蛋白的检测,21kd很单一
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