重叠 PCR 目的条带模糊，求原因

查看数: 2017 | 评论数: 2 | 收藏 0

关灯 | 提示：支持键盘翻页<-左右->

发布时间: 2016-7-6 19:52

如下图，红色指向的为我所需要的条带，前4条还算可以，但是后面的6条结果比较差，个人觉得是后面的6条退火温度较低，体系是50ul的然后退火温度为50度。片段大小4000左右，酶为takara的HS高保真酶！求各位大侠帮小弟 ...

ipsvirus 发表于 2016-7-7 14:28:03

你做overlap PCR的详细体系是什么？两个片段加了多少，引物加了多少？PCR循环条件什么？

基于你给出的结果，给我一个简单暴力的解决方法。虽然目的条带很弱，但还是回收，再以回收产物为模板，再次PCR即可。

序道 发表于 2016-7-7 13:12:21

我觉得你引物退火温度问题，后面几个你可以换换退火温度，还有我们一般扩长片段和扩短片段的反应稍微有些调整，比如可以添加其他试剂如二甲基亚砜、buffer等等

参与人数 1	金币 +50	收起理由
ipsvirus	+ 50	赞一个！

GMT+8, 2024-5-19 21:09 , Processed in 0.092229 second(s), 36 queries .

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

回复