腺病毒载体操作手册中文版

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腺病毒载体操作手册中文版

腺病毒重组系统

AdEasyTM操作手册

目 录

第一章 简介

第二章 应用重组腺病毒的优点

第三章 AdEasyTM 技术

3.1 技术概况  

3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程  

第四章 主要流程   

4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体

  4.1.1克隆的一般原则     

  4.1.2构建重组AdEasyTM转移载体

4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生  

  4.2.1共转化的一般原则   

  4.2.2共转化方法  

  4.2.3预期结果  

4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增  

4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A细胞

  4.4.1细胞铺板  

  4.4.2磷酸钙转化技术  

第五章 常用技术

5.1 QBI-293A细胞培养

  5.1.1QBI-293A细胞的初始培养   

  5.1.2QBI-293A细胞的维持培养和增殖

  5.1.3QBI-293A细胞的冻存   

5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生

  5.2.1感染QBI-293A细胞

  5.2.2病毒空斑形成

  5.2.3琼脂糖覆盖被感染细胞  

5.3 MOI测定

5.4 腺病毒感染力测定

  5.4.1X-Gal染色

5.5 重组腺病毒的筛选和纯化  

  5.5.1挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送   

  5.5.2病毒空斑挑选和小量扩增

  5.5.3Western杂交   

  5.5.4Southern杂交和点杂交  

  5.5.5病毒裂解产物  

  5.5.6免疫测定   

  5.5.7功能测定  

5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增  

5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒   

  5.7.1不连续密度梯度离心   

  5.7.2连续密度梯度离心  

  5.7.3病毒溶液去盐和浓集   

5.8 病毒滴度测定  

  5.8.1O.D.260 nm (VP/ml)  

  5.8.2空斑测定法   

5.8.3 50%组织培养感染剂量法   

第六章 疑难解答  

6.1 QBI-293A细胞培养   

6.2 感染力测定  

6.3 转移载体克隆  

6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组

6.5 转染QBI-293A细胞

6.6 筛选和测定

6.7 在QBI-293A细胞中表达

6.8 重组腺病毒的扩增

6.9 纯化

6.10 病毒滴度测定

全文如下：

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