细胞计数protocol

douban

如何对有核细胞进行计数？  
1. 彻底混合细胞悬液，取100µL样品至一支的试管内。
2. 用3%乙酸（含亚甲蓝，产品号 #07060）稀释细胞。骨髓、脐带血和流动外周血的样本推荐的稀释度为1/50-1/100，外周血样本，稀释度则为1/20-1/40。如果有核细胞较多，需要更高的稀释倍数。
例如：1/50的稀释，将20µL细胞无菌加入980µL的3%乙酸（含亚甲蓝）中。3%的乙酸能破裂细胞膜而保持完整的细胞核，亚甲蓝染色可使细胞核更清晰可见。细胞计数需要在样本稀释后大约10分钟以内进行。
3. 涡悬振荡，充分混合稀释的细胞样本。
4. 血细胞计数器的准备：用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。
5. 小心的用盖玻片覆盖两个小室。
6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。
7. 用微量移液器或毛细管将样本充满血细胞计数器的两个小室。不要过满或不足。
8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1 x 1 x 0.1 mm)或>100个细胞.
9. 根据下式确定细胞计数(细胞/mL)：每个方格中的平均细胞数x稀释倍数x104 = 细胞数/ mL
右图为Neubauer 血细胞计数器， 显示每个方格的组成。 深度 = 0.1 mm


如何对活细胞进行计数？  
用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液，取100µL样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法。一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。
例如：1/40稀释样本
加入50µL 细胞悬液至950µL IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100µL稀释的细胞悬液加入100µL台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。或取20µL细胞悬液加入780µL台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。
3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。
4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。
5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。
6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。
7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。不要过满或不足。
8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。分别死细胞和活细胞。死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。
9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL
10.活细胞百分比计算方法如下：
活细胞数÷(活细胞数+死细胞数)x100 =活细胞百分比

douban

你还傻傻的分不清楚吗？你还在大约估算吗？呵呵，仔细读下就明白了

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