流感病毒血凝性消失是怎么回事？

bestar

棉拭子在鸡胚上传过3代，然后冻存在-70冰箱，取出后检测血凝性消失，请教各位大侠是什么原因?

fanqunping http://biosky.haotui.com/thread-14580-1-5.html

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希望楼主能把具体情况加以描述。
1.一般而言，咽拭子中的病毒滴度很低，接种鸡胚尿囊腔或羊膜腔后的，前几次传代病毒的滴度都不会太高，不知楼主3次传代后是否测过血凝滴度，如果测过，应该知道滴度大概是多少，是否可以进行保存；
2.人流感病毒，尤其是从咽拭子获得的流感病毒在鸡胚中进行传代时，前几次传代时，不仅病毒滴度可能不会很高，而且病毒的稳定性也不是特别好，这时候需要在鸡胚中进行多次传代获得一定滴度的病毒才能保证病毒的稳定性；
3.如果已经获得比较高血凝滴度的病毒，在进行再次传代时，却未检出有血凝活性，可能考虑是否由于再次接种时所用的病毒滴度过高而产生干扰性颗粒，这时候可以降低接种剂量，继续传代进行检测。
以上建议，仅供参考，希望有所帮助！


另外提醒做流感病毒的战友们：
流感病毒的滴定方法很多，不仅可以测血凝(HAU)，还可以利用MDCK细胞进行半数组织感染剂量(TCID50)与空斑形成单位(PFU)的测定，多种方法结合使用，才能更科学的对病毒的滴度作合理的判断。

#12 已经存在干扰颗粒的尿囊液还可以再用。所谓的缺陷干扰颗粒（defective interfering particles, DIP)指的是：两种病毒感染同一种细胞或机体时，常常发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象，称为干扰现象（interference）。干扰现象可在同种以及同株的病毒间发生，流感病毒在复制过程中可能会出现包装基因组片段的差错而产生不具有复制或者感染能力的病毒，这种DIP的产生会干扰正常的病毒的复制；流感病毒在鸡胚尿囊液中连续传代，DIP可能会逐渐增加而发生自身干扰，这时候需要降低病毒感染剂量使DIP的影响达到最小，而正常的病毒得以扩增；
13#  灭活的流感病毒应该也能检测到HA活性，与10#的“血凝是不需要活病毒的。直接表达HA都有血凝活性！”相一致，而且，本人使用过裂解流感病毒测定HA滴度，也是能够测出来的，至于活毒与灭活病毒乃至减毒病毒之间HA的关系差异需要具体实验来验证。个人认为，只要HA是有活性的，就能发生血凝，与病毒是否有活性没有直接关系，确定活病毒的最佳办法是利用流感病毒感染MDCK等敏感细胞进行PFU的测定；
14# 不是指滴度过高会产生DIP，根据对流感病毒的复制研究，DIP的产生是随机的，而且产生几率也挺高的，只是如果病毒滴定的时候只测定了HA滴度而为测定PFU等滴定的时候，我们就可以怀疑高HA滴度的病毒中DIP的量也可能高，如果是这样的话，使用含有大量DIP的流感病毒接种传代的时候，那么复制使所受的感染也会增加。DIP干扰的具体机制不是很清楚，可能是由于诱发机体产生IFNr，也可能是竞争结合病毒受体。所以我在回复的时候再次提醒各位战友“另外提醒做流感病毒的战友们：流感病毒的滴定方法很多，不仅可以测血凝(HAU)，还可以利用MDCK细胞进行半数组织感染剂量(TCID50)与空斑形成单位(PFU)的测定，多种方法结合使用，才能更科学的对病毒的滴度作合理的判断。 ”