【转移贴】关于香菇病毒

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原帖由yixian1123发表于 2008-6-10 10:56 http://biosky.haotui.com/thread-5422-1-4.html?jdfwkey=tydzi3

呵呵,转来转去.似乎就真菌病毒版块人气不旺呢.本人现在研究方向即是食用菌病毒.近几年各地爆发的大面积食用菌病害即被怀疑是病毒造成，对于病毒病目前只有防治，防治应从选育菌种着手，从这方面来讲脱毒菌种的工作刻不容缓，但是食用菌家族中香菇又被大家认为是很特殊的一类，先后有很多学者专家报道香菇抗感冒病毒等保健作用正是因为其体内存在的dsRNA在起作用，通过诱导产生干扰素来使感冒病毒基因沉默。那脱毒苗是不是会使香菇的这种功效消失呢，不然的话又怎样既保证病毒的这种有利作用又能不让香菇发病呢，这个问题有待于进一步研究。。。。。。。。。。。

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认识个朋友先，我现在做的就是dsRNA病毒，不过是植物里面的，真菌里的研究情况有些了解
我以为国内没有做的呢，只知道陈宝善老师回广西在做栗疫病原菌里面的致弱病毒

我认为，真菌里面虽然存在很多dsRNA病毒，但是这种致病的病毒可能是单链RNA病毒，dsRNA只是它的复制中间体呢。
只有从中提取病毒粒子再从粒子中提取基因组鉴定下，才能确切知道吧

你们能让香菇脱毒吗？

[ 本帖最后由 jimmy198360 于 2008-6-10 15:27 编辑 ]

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yixian1123发表于 2008-6-11 22:33 回复 2# jimmy198360 的帖子

呵呵。楼主说的没错呢，DSRNA就是中间体的存在形式呢，脱毒方面的工作正在进行。现阶段工作主要想测下病毒序列，但因为之前未有人报道过香菇病毒相关序列，所以一直因无法设计引物而搁置了，前段时间看文献，说是加接头的方法可以一试，现在正尝试完善步骤来做下呢，但是我回收的DSRNA条带总是量很少呢，不知道楼主用的什么法子回收的呢？呵呵，浙江理工大学的陈集双老师做这一块作的挺多的，当然也主要是植物病毒呢。。。。。  

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请问大家回收dsRNA用的什么试剂盒呀？
大家好，有谁是做dsRNA病毒的？我想请教下你们回收条带用的什么试剂盒？效果怎么样呀？谢谢了！！

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7楼  wwwkkk83发表于 2008-6-17 21:52 抽提过病毒的RNA ，用的是天根的 （  天根生化科技（北京）有限公司  ）。效果不错

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yixian1123 回复 7# wwwkkk83 的帖子
呵呵，我想问的是从胶中回收呢？？谢谢了，我用的宝生物的，回收效果不好呢，生工的也用了，也不好呢，苦恼中。。。。。。  

ms003

胶回收我们用的是申能博彩的，效果还可以，可以满足一般实验需求。

http://www.biocolors.com.cn/cpzs_p.asp?p_id=8

注：
(a)      首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入50 ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。
(b)      TE pH8.0或者水均可以用于洗脱，测序样品请用水洗脱。

试剂盒DNA回收率：
    3S柱对100bp以上的DNA片段有较好的结合性能和回收率，回收率在60%以上。
主要用途：
１）从TBE或TAE Agarose 胶中回收DNA片段。
２）从溶液中回收和浓缩DNA，去除反应体系中的蛋白质。
                                                                 
操作步骤
从Agarose胶中回收DNA：
1．  用Agarose胶电泳将目的DNA片段与其它DNA尽可能分开，然后用干净的手术刀割下含所要回收DNA的琼脂块，放入1.5 ml离心管中。判定DNA片段的位置时，要尽可能使用长波长UV，在UV下照射的时间应尽可能短。
2．  按每100mg Agarose 胶加入400 µl Solution SN，置于55-65℃水浴中5分钟，中途混匀几次，至胶完全融化。胶融化后每400ul Solution SN加入100ul Solution B,混匀。注意：对于高浓度的胶 （1.5-2%），每100 mg胶加入500 µl Solution SN, 加热融胶的时间可以延长到15分钟，以保证胶全部融化，胶融化后加入100ul Solution B, 混匀。
3．  将3S柱放入2 ml收集管中, 将融化的胶溶液转移到3S柱中, 让盖子开着，室温放置2分钟。盖上离心管盖(盖子也可以不盖，但是如果您同时有很多样品，担心混淆或弄翻溶液，建议您盖上盖子)，室温离心（10,000 rpm）1分钟。
4．  取下3S柱，倒掉收集管中的废液，将3S柱放入同一个收集管中，加入600 µl Wash Solution，室温离心（10,000 rpm）1分钟。
5．  重复步骤4一次。
6．  取下3S柱，倒掉收集管中的废液，将3S柱放入同一个收集管中，室温高速离心（10000 rpm）2分钟。
7．  将3S柱放入一根新的1.5ml离心管中，在3S柱子膜中央加30 µl TE或水，不要盖上离心管盖，室温放置2分钟。注意:提高洗脱温度有利于提高DNA 的洗脱效率。也可以用预热的TE或水洗脱。
8．  盖上离心管盖(盖子也可以不盖，但是如果您同时有很多样品，担心混淆或弄翻溶液，建议您盖上盖子)，10,000rpm高速离心1分钟，离心管中的液体即为回收的DNA片段，可立即使用或保存于-20℃备用。

[ 本帖最后由 wwwkkk83 于 2008-6-17 23:08 编辑 ]