2008年3月，中科院生物物理所高光侠课题组再次于美国《国家科学院院刊》（PNAS）发表文章，题名为：“ZAP的抗病毒功能依赖于RNA解旋酶p72”。bbs.virology.com.cn: N0 [$ i  |5 D' a) h1 ~# G  D0 ~

) M6 J4 k1 S+ M7 ~6 J中国病毒学自由学术论坛宿主在与病毒长期共存的过程中进化出多种抗病毒机制，包括表达宿主限制性因子抑制病毒的复制。锌指抗病毒蛋白（Zinc- finger  Antiviral  Protein,  ZAP）是一种重要的抗病毒因子，ZAP能通过降解特异病毒RNA进而抑制包括鼠白血病病毒在内的多种病毒的复制。
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文章中作者发现，ZAP功能的正常发挥有赖于RNA解旋酶p72。ZAP与p72之间存在不依赖RNA的直接相互作用；过量表达p72 能够促进ZAP的功能；通过RNAi的方法抑制内源表达的p72或者过量表达p72的C端,ZAP降解RNA的活性则受到抑制。进一步研究发现，p72存在于ZAP与核酸外切酶复合体形成的大的复合体之中。ZAP  抗病毒机制的研究不仅可能为病毒的防治提供新的策略和技术手段，也将有助于我们更深入了解 RNA  稳定性的调控机理。
& p; A  H+ N: O5 G# p中国病毒学自由学术论坛该成果受到了国家自然科学基金、科技部973计划和院知识创新工程的资助。
/ H9 N- h; S, a( a9 c2 r1 {, j* Ibbs.virology.com.cnp72 DEAD box RNA helicase is required for optimal function of the zinc-finger antiviral proteinbbs.virology.com.cn6 [: ^. Z6 P5 g4 B+ u
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The zinc-finger antiviral protein (ZAP) specifically inhibits the replication of many viruses by preventing the accumulation of viral mRNAs in the cytoplasm. ZAP directly binds to the viral mRNAs and recruits the RNA exosome to degrade the target RNA. In the present study, we identified the p72 DEAD box RNA helicase, but not the highly similar RNA helicase p68, as a ZAP-interacting protein. The binding domain of ZAP was mapped to its N-terminal portion, whereas both the N- and C-terminal domains of p72 bound to ZAP. Overexpression of the C-terminal domain of p72 reduced ZAP's activity, whereas overexpression of the full-length p72 enhanced ZAP's activity. The RNA helicase activity was required for p72 to promote ZAP-mediated RNA degradation. Depletion of p72 by RNAi also reduced ZAP's activity but did not affect tristetraprolin-mediated RNA degradation. We conclude that p72 is required for the optimal activity of ZAP, and we propose that p72 helps to restructure the ZAP-bound target mRNA for efficient degradation.
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Published online on March 11, 2008, 10.1073/pnas.0712276105中国病毒学自由学术论坛( Y0 r1 e6 J# u; N7 S) T
PNAS | March 18, 2008 | vol. 105 | no. 11 | 4352-4357 ) T" i$ Z$ P' m; X: S
http://www.pnas.org/cgi/content/full/105/11/4352

Targeted gene knockout in mammalian cells by using engineered zinc-finger nucleases中国病毒学自由学术论坛* R  a' U: d$ \/ e6 Y
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Yolanda Santiago*, Edmond Chan*, Pei-Qi Liu*, Salvatore Orlando*, Lin Zhang, Fyodor D. Urnov*, Michael C. Holmes*, Dmitry Guschin*, Adam Waite*, Jeffrey C. Miller*, Edward J. Rebar*, Philip D. Gregory*,, Aaron Klug,, and Trevor N. Collingwood* 中国病毒学自由学术论坛+ D! n4 M$ K% @9 h+ [

* s" z* i. G, I0 N+ L% ~病毒学论坛,自由学术论坛,病毒学,交流,病毒,virus,virology,cell,immunoloy,culture*Sangamo BioSciences, Inc., 501 Canal Boulevard, Suite A100, Richmond, CA 94804; Pfizer, Inc., Bioprocess Research and Development, Cell Line Development, 700 Chesterfield Parkway West, Chesterfield, MO 63017; and Medical Research Council Laboratory of Molecular Biology, Hills Road, Cambridge CB2 2QH, United Kingdom 中国病毒学自由学术论坛; o  z4 S& _! z0 ]9 M8 @
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Contributed by Aaron Klug, January 30, 2008 (received for review November 14, 2007)
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& g! D$ j7 w4 p | 我们一直在努力!Gene knockout is the most powerful tool for determining gene function or permanently modifying the phenotypic characteristics of a cell. Existing methods for gene disruption are limited by their efficiency, time to completion, and/or the potential for confounding off-target effects. Here, we demonstrate a rapid single-step approach to targeted gene knockout in mammalian cells, using engineered zinc-finger nucleases (ZFNs). ZFNs can be designed to target a chosen locus with high specificity. Upon transient expression of these nucleases the target gene is first cleaved by the ZFNs and then repaired by a natural—but imperfect—DNA repair process, nonhomologous end joining. This often results in the generation of mutant (null) alleles. As proof of concept for this approach we designed ZFNs to target the dihydrofolate reductase (DHFR) gene in a Chinese hamster ovary (CHO) cell line. We observed biallelic gene disruption at frequencies >1%, thus obviating the need for selection markers. Three new genetically distinct DHFR–/– cell lines were generated. Each new line exhibited growth and functional properties consistent with the specific knockout of the DHFR gene. Importantly, target gene disruption is complete within 2–3 days of transient ZFN delivery, thus enabling the isolation of the resultant DHFR–/– cell lines within 1 month. These data demonstrate further the utility of ZFNs for rapid mammalian cell line engineering and establish a new method for gene knockout with application to reverse genetics, functional genomics, drug discovery, and therapeutic recombinant protein production. 中国病毒学自由学术论坛# w, h7 a; z' u, }0 w$ r. h9 O, Y& D

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# k: h' q* u: K% r* I- U | 我们一直在努力!genetic engineering | zinc-finger proteins中国病毒学自由学术论坛' ]' M: Y6 ^) a3 {
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$ x2 I  k9 c& Y% _/ l中国病毒学自由学术论坛Freely available online through the PNAS open access option.

摘要病毒学论坛,自由学术论坛,病毒学,交流,病毒,virus,virology,cell,immunoloy,culture5 y' Z( ]  H" N8 V( p4 v
研究人员发现，使用锌指蛋白技术为载体携带特异的酶阻断T细胞中的CCR5基因的表达可促进T细胞清除HIV病毒，研究结果表明，改造的T细胞可有效抵抗HIV。 http://www.ebiotrade.com/newsf/2008-7/200872171634.htm
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　北京时间7月2日消息，据美国《连线》杂志网站报道，艾滋病目前仍然是一种无法完全治愈的绝症，但科学家们此前却发现有人天生就具备HIV抗体。美国科学家日前称，通过“编辑”人体的某些特定基因，他们目前已经找到一个可以使得所有人都获得艾滋病免疫力的新方法。相关论文6月29日在线发表于《自然—生物技术》（Nature Biotechnology）上。 | 我们一直在努力!+ a1 @. l) `0 w% [# j

& k5 o" k0 O7 [6 r) k' @6 E5 g | 我们一直在努力!　　美国宾西法尼亚大学的科学家卡尔·琼恩表示，他们目前已经找到了可以使人类具备艾滋病免疫力的新方法，这标志着人类未来有望彻底摆脱艾滋病的困扰。卡尔·琼恩称，病毒一旦进入人体细胞，将接管细胞的所有功能，从而对人体的正常机能造成影响和破坏。但是在病毒进入细胞之前，却必须找到一个合适的载体。HIV病毒通常是附着于正常的CCR5蛋白质之上而进入人体细胞的。 CCR5蛋白质主要覆盖于T细胞表面。T细胞是人体两种主要的白细胞之一，对人体的免疫力和抗感染能力等机能发挥着至关重要的作用。二十世纪九十年代，研究人员曾经对一组特殊的男同性恋者进行了研究。这组男同性恋者的特殊之处在于，他们同HIV检验呈阳性的男性性伴侣保持长期的性关系，却从未被感染。中国病毒学自由学术论坛/ {& ^+ @6 J5 W& V

) R5 V  p  }) d/ u% y | 我们一直在努力!　　研究人员们认为，原因在于这些特殊的男同性恋者体内发生了基因突变。基因突变使得人体细胞不再产生正常的CCR5蛋白质，HIV病毒因此也就没有了可以进入人体细胞的载体。基于这种新的认识，科学家们试验了多种技术和方法，希望能够阻碍CCR5蛋白质的正常产生或是改变CCR5蛋白质形态使得HIV病毒无法附于其上。这样就可以阻断HIV病毒入侵的第一步。这也是“基因编辑”技术在艾滋病研究领域的应用。 | 我们一直在努力!# O! |4 J9 v3 x/ G7 J. j2 _; z
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　　研究人员们还发现，艾滋病病毒和天花病毒都是通过一个名叫“化学活性受体”的“生物锁”攻入人体免疫细胞的。这把保护人体防御机能的“生物锁”由附在免疫系统细胞表层的蛋白质构成。一旦有“外敌”入侵，这些蛋白质就会发出信号，调集白血球进行防御。但艾滋病病毒和天花病毒却都有破坏这把生物“锁”的非凡能力，它们都是在这些“锁不再发挥作用后长驱直入人体免疫系统的。他采用一种名为“锌指核酸酶”的蛋白质(即锌指蛋白)，来剥离T细胞表层的CCR5基因。锌指蛋白载有一种核酸酶，可以与基因黏附，并使基因永久开启或闭合。对于HIV病毒来说，没有了CCR5蛋白质的T细胞，几乎很难渗透入侵。
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　　但是，琼恩的所有实验都是在一些特定的细胞及老鼠身上取得成功的，实验对象并非人体。因此，对这种实验结果只能保持一种谨慎的乐观，它并不能说明该技术成果能够在人类身上同样取得成功。当然，这种技术在理论上是可行的。医生可以从HIV感染者身上提取部分T细胞，对这些细胞的基因进行重新编辑，然后再将其植入病人体内。一旦重返人体，这些经过基因编辑的抗体细胞将快速分裂、再生和扩散，而不再会受到病毒的侵扰和抑制。当然，抗体细胞的生长和扩散并不能消除HIV病毒，但是却可以保证艾滋病人体内T细胞数量的稳定增长，增强他们对继发感染的抵抗力，维持他们的健康和生命。病毒学论坛,自由学术论坛,病毒学,交流,病毒,virus,virology,cell,immunoloy,culture2 O' b$ Q) T3 b- ]: L4 Q

/ o2 t1 H* p8 D0 {" ]中国病毒学自由学术论坛　　此前，科研人员已经发现约有1%的高加索人，其遗传基因中没有这样的生物“锁”，因此是世界上对艾滋病具有天生免疫力的幸运人群。如今天花已被人类攻克，研究人员的这一新发现又给人们增添了攻克艾滋病的希望。中国病毒学自由学术论坛+ \  p0 v" b$ n+ W  w9 F
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http://news.cpst.net.cn/2008_07/214993269.html