[转移贴]培养过猪圆环病毒的进！！！

hantavirus

原贴由demonsboy 发表于 2010-9-8 16:16


大家好：关于猪圆环病毒的培养，有几个问题向大家请教下，希望大家多多帮助！
1.圆环病毒是用PK-15细胞培养的，什么时候接毒比较好？
2.接毒后，细胞仍然贴壁生长，如何收获病毒？是不是冻融三次，就可以直接收获，还有不知冻融后，细胞贴壁情况怎么样？
3.这个病毒可能需要连续盲传，连续盲传时，是直接按细胞消化传代培养，还是每代收获病毒后，接种下一代细胞培养？
4.怎么保存病毒比较妥当，4℃，-20℃ 还是-80℃
5.暂时这些，谢谢大家！

hantavirus

一只蜗牛 发表于 2010-9-8 20:25 ：

偶没做过这样的病毒。根据通常的规律，试着回答你几个问题
1.细胞应该在对数生长期，密度百分之七八十接毒。
2. 如果有CPE的时候，应该有脱落，或者贴壁不牢。吹打一下就悬起来了。如果没有CPE，就看PK-15贴壁牢靠不，不牢靠也能吹起来。牢靠就先冻一下，就能吹起来了。
3. 盲传的话，你的病毒可能滴度不高。最好收获后再接种。如果直接细胞消化，可能会稀释病毒，更不容易观察到CPE了（特别是细胞长的快，病毒周期比较长的时候）。所以，补充一下，接毒以后，降低培养基中血清浓度到2%甚至更低，有利于CPE的形成。
4.病毒除非你有好的缓冲液，一般都放-80。

hantavirus

hantink 发表于 2010-9-9 18:42 ：

若你說的是豬圓環病毒第二型(PCV-2), 那感染PK-15 細胞不會有CPE.

每種病毒凍融的次數不盡相同, 要試過才知道, 針對PCV-2是可以凍融三次收穫,細胞會全部掉落(凍融過程造成).

hantavirus

HAZE发表于 2010-9-12 19:47 ：

1.当PK15长到80%接毒最好，当然PK15细胞的活力要正常
2.反复冻融三次后再收毒，这个时候细胞一般都破裂不会粘在细胞瓶上
3.条件够就放负80，最重要的是小量分装，不要反复冻融降低了病毒活了