[转移帖]293T 细胞的冻存和复苏

hantavirus

原帖由论坛会员未知树发表于 2010-3-26 15:44 | :

我们实验室采用的冻存方案是:
1，将293T用胰酶消化，离心除去胰酶，将细胞重悬于预冷的冻存液中，分装到冻存管。
（冻存液配方：10%DMSO, 40%血清，50%DMEM。）
2，将细胞-20°C   2h，-80°C过夜，放入液氮

复苏过程：
1，将细胞从液氮取出，迅速放入42°温水中溶解，快速晃动
2，将细胞移入10ml离心管，并加入5ml DMEM, 1000rpm 10min离心
3, 弃上清，将细胞重悬于20%FBS 的DMEM中，分装到细胞瓶中培养


但是，这样复苏的细胞，已经三天了，都没有贴壁，并且，细胞形态也不规则，很多细胞貌似解体了。

请问，大家有没有冻存和复苏293T细胞的经验啊，麻烦指导一下
急切盼望中

hantavirus

bfvirus发表于 2010-3-26 19:23 | :

冻细胞时4c 放1h
细胞培养瓶最好用赖氨酸包被的。

hantavirus

randomqd发表于 2010-3-26 22:39:

冻存液配方：10%DMSO, 90%血清
用程序性冻存盒冻存细胞
复苏细胞用37°
800rpm 5min离心
复苏后死细胞较多时勤换液