重视感染性疾病血清学检测 加强性能验证及质量控制

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近日，在第十一届全国检验年会期间，卫生部临检中心王露楠教授与来自全国检验、感染领域近200位专家就“感染性疾病血清学检测的性能验证及质量控制”为主题进行了深入探讨与分享，四川大学华西医院王兰兰教授担任会议主席。
王露楠教授在报告中提出，近年来，实验室及检验行业从业人员对检测性能验证的认可逐渐提高，实验室人员应依据性能评价的结果判断，不仅仅关注呈现的指标，须了解实验室内的检测系统、性能优劣所在及检测结果的报告方式等。

筛查试验和诊断试验的区别与应用
王露楠教授表示，感染性疾病检测的临床应用可以分为筛查试验、诊断试验、确认试验和治疗监测四个方面。筛查试验是指用于筛查的定性试验必须具有高敏感性以确保感染的病原体被检出；诊断实验是指用于临床某种特定疾病或状况是否存在的诊断；确认试验是指用于验证筛查试验或者诊断试验结果的试验；治疗监测是指用于判定治疗效果的检测。
对于如何界定筛查试验和诊断试验，王露楠教授表示，“在做术前感染性疾病筛查时，肯定是以筛查为目的，这时要求试剂具备高的灵敏度，但有可能特异性相对不是很高，因此可能出现假阳性。就诊断试剂而言，因受检测人群不同，诊断试剂针对的是有可能感染人群，意味着感染可能性较高。因此，要树立的观念是，应着重强调试剂的用途，检测不同人群时应明确性能指标的关注点。”  

性能验证的主要指标介绍及应用
王露楠教授表示，实验室人员对设备系统的熟悉程度及用于性能验证的样本是性能验证的关键因素。性能验证的关键性能指标包含精密度、分析灵敏度、临床灵敏度、分析特异性和临床特异性。关于精密度，由于待评价方法不同，影响浓度接近临界值样本检测结果的精密度偏差来源也不相同；与定量检测相似，定性检测同样应考虑偏移（系统误差）和不精密度（随机误差）。评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值或阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。

   针对分析灵敏度，王露楠教授指出，单次检测没有检测出待测物，并不意味着分析灵敏度没达到要求，单次检测出待测物也不意味着达到要求。验证检测下限通过系列稀释，发现检测限以上和检测限以下符合率存在变化，理想的分析灵敏度确认曲线是通过软件统计分析得出来，这是分析灵敏度检测下限认证的重要方法。同时，分析灵敏度验证是确定室内质控浓度的重要依据。经常被混淆的概念是临床灵敏度，是指试剂对疾病感染不同阶段的样本检测能力。临床灵敏度可通过对血清转换盘的检测能力来反应，对早期样本检出能力而言，不同试剂表现差异比较大。

关于分析特异性，王露楠教授提出，交叉反应和类风湿因子是可能影响分析特异性的两个因素。而人群和流行率则是影响临床特异性的两个因素。如待测人群阳性率较低，得到阳性结果的假阳性可能性较高，所以要关注疾病的发病率。如疾病发病率高，新感染者增加，窗口期人数增加，应选择对血清转换较敏感的方法，如抗原/抗体联合检测、核酸检测等。当疾病流行率上升时，人群中真阳性数增加，为避免假阴性结果，应选择灵敏度高的试剂。所以，性能验证的结果是开展室内质控和制定结果报告流程的依据。  

实验室检测流程简介和选择  
王露楠教授在发言中指出，感染性疾病血清学检测的流程选择与确定，应根据检测目的来确认。以梅毒为例，其检测流程相对较复杂。美国和欧洲指南中关于梅毒检测流程的推荐也不尽相同。根据目前的实际使用情况，美国的大型实验室和欧洲的主要实验室都逐渐采取了以梅毒特异性抗体检测为初步实验，以梅毒非特异性抗体检测为补充实验的检测流程。当然，在实际操作过程中，需根据最初的性能验证结果来制定符合各自实验室要求的检测流程。如果以筛查为目的，建议选择灵敏度较高的试剂作为起点，当然这一过程中的假阳性问题不可忽视，建议阳性样本复检。如果以诊断为目，特异性则需要非常好。可见，性能验证结果对于检测流程的制定至关重要。

在会议讨论环节，针对发光法初检梅毒呈阴性，初检后即刻复检TPPA呈阳性，三个月后再次复检TPPA呈阴性的样本，王露楠教授表示，“免疫学检测的影响因素是多方面的，例如炎性反应会对TPPA检测产生影响，应考虑静置样本后再进行检测，所以推荐TPPA作为筛查以后的确认检测。”关于假阴性的问题，王露楠教授表示，“此现象源于检测试剂在生产过程中的抗原选择及试剂的方法学，无论是发光法还是ELISA，都可能存在假阴性情况，之前讲丙肝感染的复杂性，针对不同抗原检测的抗体会有不同的情况，梅毒的检测复杂性与丙肝类似，有一些特殊的抗原产生对应抗体片断很难检出。就感染性疾病的检测而言，不存在灵敏度100%的试剂，每种试剂都存有漏检的可能，须尽可能使用灵敏度高的试剂。

就梅毒检测这一问题，王兰兰教授认为：“实验室在做梅毒检测时会遇到较多问题，用ELISA方法检测，结果在灰区时会带来临床纠纷，因此目前很多医院使用发光法来检测梅毒。作为检验人员须了解所选择的检测方法学及试剂的性能优势所在，如临床灵敏度、分析灵敏度等。”

综上，本次会议王露楠教授对感染性疾病血清学检测的性能验证及质量控制进行了介绍，建议针对不同检测目的，将筛查试验和诊断试验区别应用，尤其对性能验证的主要指标及应用、检测流程介绍和选择等方面进行了细致详实的阐述，各位专家积极参与会议讨论罗氏诊断传染检测血清学标志物的优异性能，及其可为实验室医生、临床医生、传染病患者带来的诸多获益。