[转移帖]细胞培养 请教

zhaox

原帖由论坛会员乡村摄影师发表于 2012-1-26 18:35：

请问各位，我培养的VERO细胞145代的时候一晃培养瓶，细胞成块状脱落下来 请问是什么原因

zhaox

cjq12862发表于 2012-1-26 18:50 |

楼主应描述的详细点，让大家可以根据你提供的信息来分析，排除可能的因素。

zhaox

乡村摄影师发表于 2012-1-26 19:01 ：

这样的 ，VERO细胞培养到145代次的时候，细胞覆盖培养瓶达到90% 符合接种病毒条件，接种病毒后，继续培养，经过48小时候晃动瓶壁，发现细胞基团呈片状脱落，请问 细胞为什么脱落如此严重 （接下来收毒 势必导致宿主蛋白 增加）

zhaox

cjq12862发表于 2012-1-26 20:51 | ：

1. 楼主的目的是收毒还是收蛋白？如果是收毒，完全可以不必在意宿主蛋白的增加，何况楼主根据什么说宿主蛋白会增加呢？
2. 接种时病毒的量足够大，毒力足够强，完全可以使细胞单层在短时间内（6-24h）发生100% CPE；
3. 细胞培养条件是否符合(培养基，pH值，温度，CO2 等等）；
4. 在操作过程中细胞是否受过物理损伤，比如UV照射，洗涤换液过程操作时间过长，导致细胞干涸；
5. 是否存在其它微生物的污染。

暂时想到以上几点，请其他老师同学继续补充

zhaox

半拉木匠发表于 2012-1-27 20:37 | ：

楼上说的很全面了， 收毒之后过滤一下，掉下来的细胞就截留了，对宿主蛋白含量不会有啥影响了，即便脱落的细胞破裂了，也不会粉碎到蛋白水平，都是细胞碎片，个头大，很容易截留的，最多也就是对核酸残量有所影响。
病毒接种之后才出现以上症状，基本可以认为细胞培养体系没什么问题，感觉最大的可能就是MOI太高了。或者病毒培养液营养成分不足？
如果出现污染因该很容易观察到的，严重偏酸、浑浊。
MOI高，导致细胞大量病变脱落的话，从培养基颜色上可以看出来，偏酸。
如果培养液营养成分不足，偏碱、甚至于非常的紫

zhaox

乡村摄影师发表于 2012-1-28 22:16 | ：

对于你们的解答，在这里我表示感谢，病毒的感染强度太高可有解决方法： 减少病毒的接种量对吗

zhaox

crazy发表于 2012-1-30 09:41 | ：

楼主培养的是什么类型的病毒？
不同的病毒引起的CPE不同，肯定对细胞有不同的影响。看病毒主要是分泌出来，还是裂解细胞释放出来的。
有些病毒就是会让细胞脱落的。