[转移帖]β-丙内酯灭活对病毒结构的影响

cao1976

原帖由论坛会员caizhuoteng发表于 2012-2-10 02:31 |

用β-丙内酯灭活病毒(1:4000)对病毒整体结构会产生什么影响，会破坏病毒结构吗？
β-丙内酯水解后会造成灭活液pH下降，可能会破坏病毒，应该怎么解决？
我是做乙脑的，请大家指点指点我  

cao1976

crazy发表于 2012-2-10 10:12 ：

β-丙内酯灭活病毒对病毒结构的影响肯定远小于甲醛灭活。你是乙脑灭活苗，只要E蛋白结构在，抗原性就在，β-丙内酯的影响应该不大。保护效果你还是用动物试验来看吧，血清中和抗体效价+P3攻击毒的保护效果。
含醛基的物质除了变性蛋白外，还有交联的作用，所以用了甲醛很难不用其他去垢剂，比如TritonX-100什么的。这样要测残留的东西就多了。

你们什么缓冲体系？我记忆中BPL水解成的羟丙酸对pH应该影响不大的。低pH对乙脑活病毒确实有影响，还不小，但没关注过死苗。
你们是浓缩纯化后灭活，还是灭活后浓缩纯化？如果是前者，调整个缓冲能力相当强点的体系，如果是后者，我想培养体系的缓冲能力应该够。
还有，灭活前，最好别加人白。

cao1976

caizhuoteng发表于 2012-2-10 21:03 ：

谢谢Crazy斑竹指点，我是浓缩后灭活水解，再走柱层析。
我们的病毒收获液缓冲体系是EBS(碳酸氢钠)，浓缩后加β-丙内酯，用注射水稀释β-丙内酯后再加到浓缩液里灭活。
您说灭活前不加人白，但罐培养的病毒收获液里就不可避免的有人白，就算浓缩后浓缩液里也还是有大量人白，这又咋办？  

cao1976

Crazy发表于 2012-2-27 11:14 |

如果pH7.4的话，对乙脑病毒的影响应该不大的。
乙脑活疫苗冻干前调节pH一般都低于这个pH的。活病毒尚无太大影响，死病毒就应该更小。
之前我还以为水解后pH变到5点几，6点几呢……我就纳了闷了，以前没遇到过BPL水解后pH大幅降低的情况呢。

cao1976

caizhuoteng发表于 2012-3-6 22:31 |

To Crazy斑竹

PBS是不会对缓冲系统有影响的，但是可以用来中和BPL的酸性，这样灭活时好控制灭活液的pH不变
BPL挺酸的，我测过pH=3.1
版主PBS的PB浓度是多少？

cao1976

Crazy发表于 2012-3-7 08:46 |

To caizhuoteng

NaCl, KCl, Na2HPO4和KH2PO4，配成等渗的PBS。这个配方到处都有的。
其实疫苗很多东西没有想象的那么苛刻，百分之一的体积加入的话，注射用水和PBS即使有差别也应该不大，特别是你们水解后pH才7.4，根本不算低。

网上随便查了一个等渗PBS配方，都一样的：
PBS 1L配方:
　　氯化钠(NaCl)，8g
　　氯化钾(KCl)， 0.2g
　　磷酸氢二钠(Na2HPO4)，1.44g
　　磷酸二氢钾(KH2PO4)， 0.24g　
　　调pH 7.4, 定容1L
　　然后高压蒸汽灭菌，室温保存。

cao1976

1寸发表于 2012-6-15 21:04 |

我们公司生产人用狂苗，用注射用水稀释后加入浓缩液中灭活，浓缩液pH在7.6附近，假如灭活后PH下降一个单位左右，那么也就是说溶液的PH接近等电点6.7了，那么狂犬病毒上的糖蛋白不久不稳定了吗？求解