[转移帖]求助：鸡胚成纤维细胞传代能到多少代？

zhaox

原帖由论坛会员素年锦时发表于 2012-8-21 15:35 |

我自己试验过，用原代细胞传代，最多可传七代。

zhaox

半拉木匠发表于 2012-8-22 07:39 | ：

这个 作为比较成熟的疫苗细胞株 ATCC 网站上看看吧   无实际经验 确实不知道

zhaox

crazy发表于 2012-8-22 13:39 | ：

五、原代细胞的要求

原代细胞应来源于健康的动物脏器组织或胚胎，包括猴肾、地鼠肾、沙鼠肾、家兔肾、狗肾或动物的胎儿和其他组织以及鸡胚和鹌鹑胚等正常组织，以适当的消化液消化、分散组织细胞进行培养，原代细胞不能建立细胞库，只能限于原始培养的细胞或传代少数几代内（一般1-5代内）使用，无法事先标定。因此，只能严格规范管理和操作措施，以保证以原代细胞为基质所生产的制品质量。
（一）动物组织来源和其他材料
1．动物组织来源
应符合“凡例”的有关要求。对各种动物都应有明确健康状况和洁净级别要求。
2．生产或检定用猴
多采用非洲绿猴、恒河猴等，我国以恒河猴为主。应为正常健康猴，以笼养或小群混养。动物用于制备细胞前，应有6周以上的检疫期，检疫期中出现病猴或混入新猴，应重新检疫。从外面新引入猴群应作结核菌素试验及猴疱疹I型病毒(B病毒)的检查。
胎猴肾可用于生产，对其母猴应进行检疫。
（二）原代细胞培养物的检查
用于细胞制备的动物剖检应正常，取留的器官组织亦应正常，如有异常，不能用于制备细胞。
1．细胞培养原材料检查及细胞培养操作按本规程 ‘原材料的选择’及‘细胞培养操作的环境要求’进行。
2． 细胞培养物的检查
（1）  细胞形态检查
细胞在接种病毒或用于生产前，其培养物均应进行外观检查和镜检，应无任何可疑、异常和病变，否则不得用于生产。
（2）  对照细胞检查
每批消化所得原代细胞留取5% (或至少500ml)悬液，不接种病毒，细胞浓度和处理均与生产制品过程相同，至少观察14天，并作下列各项检查，结果均应为阴性。
①　无菌检查
  依法检查，应符合规定（附录XII A）。
②　支原体检查
依法检查，应符合规定（附录XII B）。
③外源病毒污染的检查
对观察到期的细胞，按本规程4（1）项‘细胞形态观察及血吸附试验’和4（2）项‘不同细胞传代培养法检测病毒因子’项进行外源病毒污染检测。
④　原代细胞培养物特定病毒检查
原代猴肾细胞培养应检查SV40病毒、猴艾滋病毒和B病毒。应用Vero或原代绿猴肾细胞、兔肾细胞检查。地鼠肾原代细胞应用BHK21细胞培养检查，观察细胞形态，如有可疑应在同种细胞上盲传一代继续观察。
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看你怎么用，我们一般就用原代的。
没有再消化再传了，生产用一般这样。

zhaox

素年锦时发表于 2012-9-3 09:21 ：

生产用确实是用原代细胞的，但是想尝试用传代细胞，也许可以降低生产成本。据我所知，目前国内是有企业用传代CEF制备疫苗的。

zhaox

liangjiaxu发表于 2012-9-4 19:39：

生产一般用是原代细胞的,如果单是为了降低生产成本.特别是减毒活疫苗,鸡胚成纤维细胞传代后可能会有大安全风险.可能会有违反药品注册相关法规.
自已做试验传代还可以，如果用来生产疫苗，估计不会有人做传代疫苗，我们在鸡胚上实验，不成呀。