[转移帖]关于宿主残留核酸的检测

cao1976

原帖由论坛会员rabies发表于 2008-7-30 09:57 |

目前疫苗很多是细胞培养的，如vero细胞，不知道在生产工艺中如何去除细胞的核酸成分和检测疫苗中的核酸残留？  

cao1976

gpj402发表于 2008-7-31 09:03 |
因为这个知道的不是太全，这里只把我知道的一点说出来。
去除细胞的核酸成分。首先要看你的蛋白是分泌表达还是胞内表达的。如果是分泌的，基本上就不太用考虑去除了，因为在培养基及表达蛋白的混合物中只存在很少量的核酸；如果你的是胞内表达的蛋白，那么纯化目的蛋白的步骤诸如细胞破碎，IEX，GL，几个步骤会把核酸去除的差不多了，如果终产品中的核酸还是比较多的话，就要在你的纯化步骤中加一步吸附核酸的层析。
检测疫苗中的核酸残留。药典中要求的是用SOURTHERN的方法。
就知道这些了，希望对你能有所帮助。

cao1976

dudupan发表于 2008-10-15 23:52 | ：

对于核酸残余，对于传统苗来说可能病毒是一个重要的考核指标，但是对于基因工程苗以及基因工程生物制品来说，却是一个重要的指标。药典规定，对于上述制品，每个剂量的核酸残余不能够超过10ng。至于核酸残余的鉴定方法，请查考药典第三部，上面所提供的标准方法是探针杂交法，目前常用的是地高辛标记的探针。对于传统苗中的宿主DNA残余，可以采用荧光定量PCR的方法，针对宿主细胞保守区段设计引物，建立PCR系统，进行定量检测。可以参考下面的文章。虽然说的是DNA疫苗，其实和传统苗宿主DNA的检测是差不多的。