2010年版《中国药典》人用狂犬病疫苗效价测定法（NIH法）

hantavirus

本法系将供试品免疫小鼠后，产生相应的抗体，通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。
试剂 稀释液（PBS） 量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，调pH值至7.2～8.0。
攻击毒株CVS制备
启开毒种，稀释成10-2悬液，接种11～13g小鼠，不少于8只，每只脑内接种0.03ml，连续传2～3代，选择接种4～5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织，研磨后加入含2%马血清或小牛血清制成20%悬液，经每分钟1000转离心10分钟，取上清液经病毒滴定（用10只18～20g小鼠滴定）及无菌检查符合规定后作攻击毒用。
参考疫苗的稀释
参考疫苗用PBS稀释成1∶25、1∶125和1∶625等稀释度。
供试品溶液的制备
供试品用PBS做5倍系列稀。测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12～14g小鼠16只，每只小鼠腹腔注射0.5ml，间隔1周再免疫1次。
小鼠于第一次免疫后14天，用经预先测定的含5～100个LD50的病毒量进行脑内攻击，每只0.03ml。同时将攻击毒稀释成100 、10-1、10-2 和 10-3进行毒力滴定，每个稀释度均不少于8只小鼠。小鼠攻击后逐日观察14天，并记录死亡情况，统计第5天后死亡和呈典型脑症状的小鼠。
计算供试品和参考疫苗ED50值。
计算相对效力
P＝T/S×dT/dS×D
式中P为供试品效价，IU/ml;
T为供试品ED50的倒数；
S为参考疫苗ED50的倒数；
dT为供试品的一次人用剂量，ml；
dS为参考疫苗的一次人用剂量，ml;
D为参考疫苗的效价，IU/ml。
【附注】（1）动物免疫时应将疫苗保存在冰浴中。
（2）各组动物均应在同样条件下饲养。
（3）攻击毒原病毒液(100 )注射的小鼠应80%以上死亡。