[转移贴]求助：接种病毒遇到的问题

cao1976

原贴由nosuffer 发表于 2009-7-18 11:15
http://biosky.haotui.com/thread-10931-1-7.html

接种用材料为枯叶保存的马铃薯y病毒，用的tris-hcl ph=7.2 0.1M 含0.1%亚硫酸钠，使用缓冲液直接研磨，6000rpm短离心，收集上清，100-200目金刚砂接种叶面，但最后发现叶面没有明显症状，不知道问题在哪里，希望过来人指正，谢谢。

以下为会员回复：
————————————————————————————————————
jbclinnic 发表于 2009-7-18 11:59：取接种的叶片RT-PCR看看有没有接上？

接种植物？具体株系，有的株系接种会有隐症的
接种的金刚砂太粗吧，一般400-600目，微伤口就好
接种后应该暗处理会好点吧
————————————————————————————————————

wjg_1979 发表于 2009-7-18 17:09 ：To 1# nosuffer
应该用新鲜，证明有毒的（完全可以保存在冰箱，但是时间太长的叶片很难接上）的叶片来接种，温度具有重要的作用，但接种技术也相当关键，主要是力度要恰当，不能太重，太重了叶片枯死，接不上，太轻又不能产生足够的创伤也不能接上．总之，不同的病毒，在接种条件上会有差别，有时会很大．
————————————————————————————————————————
nosuffer 发表于 2009-7-18 17:21 ：谢谢两位的帮助。我是接种在花魔芋上，用了症状最好的叶片，跑了rt-pcr，带很浅，几乎不可见，不知道哪个公司有500目以上金刚砂卖？咨询了很多地方都没有。怎么上图啊，可以给2位看看图。
————————————————————————————————————————
dongguan发表于 2009-8-4 20:20：如果用干燥的样品来接，经常会出现接种不成功的情况。建议保存在-80或-20冰箱。原来我也是习惯用干燥的样品，后来大部分都失活了，可惜。。。。。。。。。。。。