[转移贴]流感疫苗求助

cao1976

原贴由论坛会员zwzwzw_79发表于 2008-5-8 18:39

蔗糖密度梯度离心纯化病毒，然后采用超滤用PBS置换蔗糖，置换前后病毒的滴度有下降很大，不知道大家认为是什么原因啊？怎么解决呢？

cao1976

aivr145发表于 2008-5-8 22:19 | ：


请具体说下吧,超滤用的是多少的分子量!您指的是血凝滴度还是感染滴度!

如果您做的是血凝滴度就是用血凝效价来衡量的话 那么有一种可能是:

由于超离之后的纯化病毒液含有高浓度的蔗糖,当你做血凝的时候稀释的过程中(我一般用96孔板)蔗糖很粘会多余带很多病毒到下一孔,从而影响稀释的精度造成累积的不准确的效价,也就是说除糖之前做血凝不会很准确,造成除去蔗糖后病毒损失很大的假象,会有一些偏差,不过仔细到位的稀释差距不会很大!解决的方法很多也很简单,具体情况可以详细说!!这只是一直实际中的情况,不知道是不是这方面的原因,希望有帮助!

cao1976

lucky发表于 2008-5-10 20:00 ：

确实存在这样的问题，我做过超离纯化流感病毒，从PFU、TCID50 、血凝滴度这几个方面的指标上看，病毒滴度都较纯化前有所下降。如果说光是血凝滴度下降了，还是比较好理解的，但是从PFU与TCID50的指标看，病毒的感染能力也下降了，确实有点费解。希望有经验的人士多多指点！

cao1976

zwzwzw_79发表于 2008-5-12 22:17 ：
是的，我刚做了个单扩也是下降了。我会继续实验，也希望和大家多探讨。至于卵白，个人感觉超滤的时候多点倍数的缓冲液衡滤，效果会好点。

cao1976

zwzwzw_79发表于 2008-5-12 22:17 ：
是的，我刚做了个单扩也是下降了。我会继续实验，也希望和大家多探讨。至于卵白，个人感觉超滤的时候多点倍数的缓冲液衡滤，效果会好点。

cao1976

aivr145 发表于 2008-5-13 21:50

To lucky：

滴度的下降是必然的啊 就算有保护剂的情况下也很难完全保持新鲜病毒培养液的滴度!况且有理化等因素的影响!

我想这也是之所以病毒传代所须种种条件的原因!

做了很多年的流感疫苗,从超滤和纯化来讲单单看血凝滴度 不会有明显的损失,如果明显的下降和损失那还是步骤中有问题的!!!

期待你们的交流啊,自己经验也不多!!!

cao1976

aivr145 发表于 2008-5-13 22:02

原帖由 zwzwzw_79 于 2008-5-12 22:17 发表
是的，我刚做了个单扩也是下降了。我会继续实验，也希望和大家多探讨。至于卵白，个人感觉超滤的时候多点倍数的缓冲液衡滤，效果会好点。

做单扩了是吧,样品是 超滤前 超滤后 纯化后 之间的比较么!!从血凝素定量这个角度来讲损失应该更不明显.恩,的确卵白我们现阶段也只是用缓冲溶液来不断的洗,不过问一下您是在裂解前衡滤还是之后还是都有!您出过成品或者半成品么/ml大概能做到多少!!