一种高灵敏PCR：COLD-PCR及其衍生技术的原理与应用

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　在第十一次全国检验医学学术会议上，来自福建医科大学附属第一医院的欧启水教授为业界同道分享了精彩的讲座《一种高灵敏PCR：COLD-PCR及其衍生技术的原理与应用》。

　　在个体化医学和精准医学时代，高灵敏度和高特异性诊断方法的研发与应用尤显重要。这体现在临床工作中的具体范畴是，检验工作者应如何在含有大量野生背景的血清/组织样本中准确地检测出少量突变基因。

　　近几年来发展的低变性温度共扩增PCR（Co-amplification at lowerdenaturation temperature-PCR，COLD-PCR）是一种新的利用不同Tc值富集少量突变基因而便于检测的方法，具有灵敏度高、特异性较强、重复性好等优点，2008年Li等报道后便得到广泛关注。COLD-PCR不论突变基因存在于什么位置、不论突变是否已知或是何种类型（点突变、插入、缺失），均能从大量野生型基因背景中选择性扩增出少量的突变基因。PCR通常是各种DNA突变检测技术的必须的起始步骤。与普通PCR相比，COLD-PCR对突变的富集能力大大提高，可以大大提高各种突变技术的灵敏度。

　　目前，COLD-PCR可分为完全COLD-PCR和快速COLD-PCR的衍生技术包括ice-COLD-PCR(improved and complete enrichment COLD-PCR)及TT-COLD-PCR（temperature-tolerant COLD-PCR）等。如今，COLD-PCR及其衍生技术与高分辨率溶解曲线分析、TaqMan探针、Sanger测序法、NGS等下游检测平台结合，已开始应用在肿瘤个体化诊疗、无创性产前诊断、HBV基因型耐药检测等领域。
　
　　COLD-PCR将革命性地提高常规PCR的检测性能，且其无需特殊的试剂、仪器设备、操作简便，不失为一种普通实验室可选的lab-developed-test（LDT）技术。