HBV基因分型和耐药监测

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HBV已发现有A~I 9个基因型，在我国以C型和B型为主。HBV基因型和疾病进展和干扰素α治疗效果有关。HBeAg阳性B基因型感染患者对干扰素α治疗的应答率高于C基因。拉米夫定、阿德福韦酯和替比夫定等核苷酸类似药是乙型肝炎抗病毒治疗的常用药物，但随治疗时间延长，拉米夫定病毒耐药突变的发生率增高 (第1、2、3、4年分别为14%、38%、49%和66%)。阿德福韦酯治疗5年时患者的累积耐药基因突变发生率为29%、病毒学耐药发生率为20%、临床耐药发生率为11%。有研究表明，恩替卡韦3年累积耐药率为1.7%～3.3%。替比夫定组HBV DNA下降至PCR法检测水平以下者为60.0%、ALT复常率为77.2%、耐药发生率为5.0%。

　　有关HBV基因型和耐药检测的商品试剂盒，国内也有应用小沟结合（ＭGB）探针YMDD耐药基因突变检测实时荧光PCR和PCR-反向斑点杂交试剂盒，实时荧光PCR方法很难避免假阳性结果的出现，临床较少应用，PCR-反向斑点杂交试剂盒对于点突变检测相对可靠，但这种方法由于涉及开放式的产物分析过程，对实验室分区和实验操作防“污染”要求高，也容易因为“污染”出现假阳性结果。一些实验室采用基于自配试剂Sanger测序方法，这种方法是基因突变检测的金标准，属于实验室自建方法和自配试剂（laboratory developed tests, LDT）。所存在的问题是，国内实验室在LDT过程中，基本于遵循的是一种研究生的科研思路，即购买各种基本试剂如酶、含dNTP的扩增缓冲液、设计引物和探针让厂家合成，然后合在一起即用于临床检测，有的实验室甚至测序过程由测序公司完成，这是一种完全的科研思路，绝不可以用于临床检测。国外对于LDT是有严格要求的，要求实验室在将购买来的各种试剂组成成份组成试剂盒后，临床应用前必须进行检测性能确认，包括检测的精密度、准确度、可测定范围、分析敏感性、分析特异性（包括抗干扰能力）等，并且所有的试剂制备及性能确认过程均必须有文件化的程序及记录。只有这样，才能保证LDT用于临床检测的可靠性和有效性。

作者：卫生部临床检验中心李金明