成都研究人员开发出一种最新的miRNA检测方法

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最近，成都中医药大学、都江堰医学中心和成都诺恩生物科技有限公司（Nuoen）的研究人员，开发出一种最新的miRNA检测方法，可以帮助我们把microRNA转变成为强大的诊断标志物，并减少不适当的抗生素处方。

　　作为各种各样疾病的一种重要调节分子，microRNAs（miRNAs）用作非侵入性诊断生物标志物，已经显示出巨大的潜力，可能有一天被用于早期诊断和预后。然而，目前还没有一种miRNAs检测方法已被证明足够可靠地应用于临床。

　　这种新的miRNA检测方法——命名为miRNA衍生片段长度多态性（miRFLP），可以快速、准确地验证体液标本中的miRNA标记，以用于临床设置的疾病诊断。这一研究结果发表在最近的Nature子刊《Scientific Reports》。

　　本研究负责人徐凯（Kai Xu）指出：“相比较其他方法，miRFLP法为我们提供了一种可靠的miRNA检测方法，是唯一能够在不同种类粗样品中直接检测microRNA拷贝数的方法。这使我们能够在24小时的时间框架内，为患者提供测试结果。”

　　徐凯的研究小组发现，特定的miRNA往往通过在血液和其他体液中上调或下调，而反映各种不同的疾病。利用miRFLP技术，该实验室将可以将目标miRNA与合成RNA spike-ins组合，同时转换成不同大小的DNA片段。通过同时测量miRNA和RNA spike-ins，实验室可以从少量未纯化的血液样本中，直接获得目标miRNA拷贝。

　　通过实验，该研究团队最终发现，只需要0.2毫升的血清，就能精确地检测出低至每个样本中一个拷贝的目标miRNA数量。

　　徐凯解释说：“不同于其他的方法，我们利用PCR来同时扩增所有信号，利用毛细管电泳技术检测不同大小的片段及其荧光。我们用它来制作一个标准曲线，并测定每个目标microRNA数量，其余部分是一个程序，将它们转换为真实副本。”

　　新的方法能提供一个有价值的非侵入性替代方法，很快检测器官损伤、癌症、糖尿病和许多其他疾病。根据徐凯介绍，miRFLP的第一个临床试验，将与哮喘密切相关的microRNA表达上调，与患者细菌或病毒感染相关的microRNA区分开来。

　　徐凯说：“用一滴血，我们就可以告诉你是否患有哮喘、细菌感染或病毒感染。我们的测试法将给病人带来很多好处，并避免滥用抗生素，这是一个全球问题。”

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近日，德国萨尔州大学临床生物信息学部的Andreas Kappel等人设计了一种新的量化微小RNA（miRNA）的免疫分析方法，他们的miRNA免疫分析法在常规的实验室条件下，能保证有miRNA免疫分析的灵敏度和较高的特异性。研究结果发表在《临床化学杂志》（Clinical Chemistry）。

新的生物标记在临床实践中的实施是医学研究领域中最为重要的领域之一。除了它们的临床影响外，新的体外诊断标记物还可能对医疗成本有大幅影响。尽管许多出版物报道了生物标记物的发现，但是仅有很少的一部分在常规使用。一个关键的挑战是测量系统与临床工作流程兼容。

研究人员设计了一种新的量化miRNA的免疫分析法。这种分析结合了链霉亲和素、某种单一的miRNA互补的生物素标记的微粒捕集器以及吖啶酯标记的DNA/RNA聚合体的单克隆抗体。最重要的是，这种分析采用标准的免疫分析法。经过一种检测技术验证后，研究人员还评估了该检测方法检测4种阿尔茨海默病的miRNA的临床表现。

结果表明该分析法特异性为99.4%，同时也很灵敏（浓度范围在1 pmol / L的miRNA可以被可靠的检出）。因为新的方法不需要放大步骤，可以得到重复性高达40的生物复制。重要的是，该分析在三小时内可以得到结果。在人类的血液样本中，这种检测法具有82%的诊断精度检测阿尔茨海默病的4种miRNA，并且与金标准qRT-PCR相比，皮尔森相关性> 0.994。