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[细菌] [转移贴]细菌染色标本检查方法之抗酸染色法—萋-尼抗酸...

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发表于 2015-6-21 00:11:37 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
原贴Anthonybell 发表于 2010-3-22 13:51
http://biosky.haotui.com/thread-14113-1-3.html



(1)实验材料
①染色液。石炭酸复红液、碱性美蓝溶液、3%盐酸酒精。
②菌种。含结核分枝杆菌的痰标本。
③其他。普通玻片、酒精灯、接种环及显微镜等。
(2)实验方法
①涂片
a、直接涂片和厚膜涂片。用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液,制成10mm*10mm大小的均匀薄涂片,或取上述标本约0.1ml,制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。自然干燥,火焰固定后,行抗酸染色或金胺“0”荧光染色,镜检。
b、集菌涂片。І、沉淀集菌法。取痰液2—3ml,40g/lNaOH1—2倍量混匀。经103.43Pa高压灭菌20—25min(或煮30min),3000r/min离心30min,弃上清液,取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”荧光染色镜检;П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶内,加1—2倍量40g/lNaOH溶液,经103.43Pa高压灭菌20—25min(或煮30min)。冷却后滴加汽油0.3ml,瓶口盖玻璃纸加塞,塞紧瓶口,置振荡器或手摇振荡10min,再加蒸馏水至满瓶口而又不外溢,静置10—15min,将已编号的洁净载玻片盖在瓶口上,静置15—20min,取下载玻片并迅速将载玻片翻转至浸膜向上,或用接种环取瓶口液面物涂于载玻片上,自然干燥,火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”荧光染色,镜检。
②染色
a、初染,在已固定的结核分枝杆菌痰标本涂片上放一小块滤纸片,之后滴加数滴石炭酸复红液后,将标本片放在火焰高处徐徐加温,当涂片上液体出现蒸汽时离开火焰(切不可煮沸),待玻片稍冷却后补充染液(以防干燥或玻片断裂 ),如此维持染色3—5min,待玻片冷却后用水冲洗,甩干。
b、脱色,在涂片上滴加数滴3%盐酸酒精,轻轻晃动玻片,直至无红色液体流下为止,一般作用1—3min,水洗,甩干。
c、复染,滴加数滴碱性美蓝液于涂片上,作用1min后,水洗,甩干。用吸水纸印干标本片或 自然干燥后油镜检查。
(3)结果判断和报告
结核分枝杆菌染成红色,菌体细长,有时微弯,呈分枝状排列,有时着色不均匀,呈颗粒状。非抗酸菌及标本中其他细胞均染成蓝色。
①直接涂片和厚膜涂片结果
—:仔细观察至少300视野未发现抗酸菌;
士:300个视野内发现1—2个抗酸菌(全部涂膜镜检3遍);
+:100个视野内发现1—9个抗酸菌(全部涂膜镜检1遍);
2+:10个视野内发现1—9个抗酸菌;
3+:每个视野内发现1—9个抗酸菌;
4+:每个视野内发现9个以上的抗酸菌。
②集菌涂片结果。按“发现抗酸染色 阳性细菌”或“未发现抗酸染色阳性细菌 ”报告。
(4)注意事项
①每张载玻片只允许涂1份标本,不得涂2份或2份以上标本,以免染色过程中菌体脱落而导致阴阳结果混淆。使用过的玻片要彻底清洗干净后才能再次使用,以防抗酸菌遗留在玻片上。
②抗酸染色时切勿使用染色缸。用于吸水的滤纸只能1片1张,不可重复使用。镜检时每检查 1份标本后,均需揩拭油镜头。滴加香柏油的玻璃棒或竹签不得触及玻片。
③抗酸染色时,脱色剂脱色时间宁长勿短,结核分枝杆菌脱色时间长至10—20min而不被脱色;而非抗酸菌则易脱色,故延长脱色时间有一定的鉴别作用。
④为了防止实验室感染,可先将待检的结核分枝杆菌标本高压灭菌后,涂片染色。这样既安全又不影响实验结果(此法仅用于大规模实验)。
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